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实验二 丹皮酚微囊的制备及含量测定 【目的要求】 1. 学习了解微囊剂型。 2. 掌握用复凝聚法，以壳聚糖-海藻酸钠为囊材，制备丹皮酚微囊。 3. 掌握用紫外分光光度法测定微囊的包封率、载药量。 【实验材料】 （一）仪器： 1. 万分之一电子分析天平； 2. 磁力搅拌器； 3. 752型紫外可见分光光度计； 4. 恒温水浴锅； 5. 其他：布氏漏斗；移液管（5 mL×1，1 mL×1）；容量瓶（2 mL×1，10 mL×5，1000 mL×2）；一次性注射器（2.5 mL×1，10 mL×2），针头（10 mL注射器的7号针头）；锥形瓶（100 mL×5）；烧杯(100 mL×2，250 mL×2)；量筒（50 mL×1）；玻璃棒；pH试纸；洗耳球；温度计。 （二）试剂： 1. 1%海藻酸钠； 2. 0.2%壳聚糖； 3. 1%氯化钙； 4. 1%的醋酸溶液； 5. 无水乙醇（分析纯）； 6. 甲醛（分析纯）； 7. 1 mol/L NaOH，0.2 mol/L NaOH； 8. 蒸馏水。 （三）药物： 丹皮酚 【实验原理】 海藻酸钠和壳聚糖是两种分别荷负电与正电的高分子材料，他们均无毒、生物相容性好、可生物降解的天然高分子材料，两者均因其良好的成膜及成型性而被广泛应用于药物制剂、组织工程、临床治疗、细胞培养、食品加工等。 壳聚糖-海藻酸钠制备微囊的原理主要有两个反应： 1. 海藻酸钠滴入多价阳离子溶液（如钙离子）时具有瞬时凝胶化的特性。反应式可以写作（以钙离子为例）：NaALG（海藻酸钠）+Ca2+(CaALG（海藻酸钙凝胶）+Na+。 2. 壳聚糖是一种阳离子聚电解质多糖，其分子链上具有大量的伯氨基；海藻酸钠是一种阴离子聚电解质多糖，其分子链上有大量的羧基，所以海藻酸钠和壳聚糖可以通过正负电荷吸引形成聚电解质膜，其反应如下： 标准曲线的绘制： 精密称取丹皮酚1.6 mg置10 mL容量瓶，加适量无水乙醇溶解，超声0.5 h，静置冷却，用无水乙醇定容。精密吸取上述溶液5 mL置50 mL容量瓶中，加无水乙醇定容至刻度，摇匀。分别精密吸取1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0 mL置10 mL容量瓶中，加入无水乙醇定容至刻度，摇匀。配成质量浓度分别为1.6, 3.2, 4.8, 6.4, 8.0 mg·L-1的标准溶液，于274 nm处测定吸光度A，以吸光度A与对应浓度C线性回归制作标准曲线。 【实验方法】 海藻酸钠、氯化钙、壳聚糖的浓度是影响制备微囊的三个主要因素；现以海藻酸钠1%、氯化钙1%、壳聚糖0.2%的处方制备丹皮酚微囊： 1. 精密称取一定量壳聚糖，置于1000 mL容量瓶中，用1%醋酸溶液定容，配制0.2%的壳聚糖醋酸溶液。 2. 精密称取一定量氯化钙，置于1000 mL容量瓶中，并用蒸馏水定容，配制1%氯化钙溶液。 3. 精密称取0.5 g丹皮酚，置于2 mL容量瓶中，无水乙醇定容，超声溶解0.5 h，至完全溶解，冷却定容。 4. 精确量取20 mL蒸馏水置于100 mL烧杯中，加热升温至60(70 ℃；将精密称量的海藻酸钠粉末磁力搅拌（200 r/min）至海藻酸钠完全溶解，海藻酸钠溶液呈澄清无气泡。 5. 将海藻酸钠溶液冷却至40 ℃，在磁力搅拌机上边搅拌（200 r/min）边缓慢用注射器加入0.5 g丹皮酚，加入完全后，继续搅拌30 min，至丹皮酚海藻酸钠混合溶液乳化，得到乳白色的丹皮酚海藻酸钠乳化液，称量记重M1。 6. 量取50 mL氯化钙溶液置于100 mL锥形瓶中；用10 mL注射器吸取适量步骤5中制得的丹皮酚海藻酸钠乳液，用7号针头将乳液以每分钟20滴速度，针头距液面30 cm，缓慢滴入一定浓度的氯化钙溶液中，期间维持丹皮酚海藻酸钠乳液40 ℃。微囊全部沉下去，得淡黄色微囊小球后，抽滤；滴制完成后烧杯和转子量记重M2。 7. 量取20 mL壳聚糖溶液置于100 mL烧杯中，用1 mol/L的NaOH调节壳聚糖溶液pH=6.0，将微囊加到壳聚糖溶液中，静置反应1 h，得白色微囊，抽滤。 8. 量取30%甲醛溶液20 mL置于100 mL烧杯中，将抽滤得到的微囊加入烧杯中静置固化1.5 h，抽滤，得到白色微囊。水洗3次，醇洗3次，干燥48 h，即得。 9. 包封率和载药量的测定：精密称取丹皮酚微囊0.060 g于研钵中，加入无水乙醇，研磨破坏微囊，完全转移至10 mL容量瓶中，超声30 min完全破坏微囊，冷却后用无水乙醇定容；稀释5000倍并于274 nm处测定吸光度A。 【实验结果】 包封率=微囊中含药量/投药量×100% 微囊中丹皮酚含量(测)×理论总重(20.7 g)×制得的微囊总重(测) 丹皮酚投药量(0.5 g)×实际总重(M1-M2)