实验四红霉素的摇瓶发酵.docVIP

实验 红霉素的摇瓶发酵 一、目的要求 1.。 2. 。二、基本原理 柠檬酸C37H67NO13 ，分子量：733.93 2. 　为大环内酯类抗生素，抗菌谱与青霉素近似，对革兰阳性菌，如葡萄球菌、化脓性链球菌、绿色链球菌、肺炎链球菌、粪链球菌、溶血性链球菌、梭状芽孢杆菌等有较强的抑制作用。对革兰阴性菌，如淋球菌、螺旋杆菌、百日咳杆菌、布氏杆菌、军团菌、脑膜炎双球菌以及流感嗜血杆菌、拟杆菌、部分痢疾杆菌及大肠杆菌等也有一定的抑制作用。作用机制主要是与核糖核蛋白体的50S亚单位相结合，抑制肽酰基转移酶，影响核糖核蛋白体的移位过程，妨碍肽链增长，抑制细菌蛋白质的合成，系抑菌剂三、实验材料 1．菌种? ?2．实验器材? ?1 mol/L NaOH；1 mol/L HCl10mL 、5mL吸管、接种环； 酒精灯滤纸，漏斗三角瓶200ml量筒广范pH试纸玻璃棒滴管，天平。 培养基：，，，四、实验步骤（实验内容） ?1．菌种活化菌种活化：对于已长久保存的菌种，需经斜面培养基活化培养一次，即取保存的斜面菌种，移至，经℃斜面培养至孢子长好，作为活化后的种子。 2.种子的制备：取活化好的斜面菌种，无菌操作（不要在无菌室），取ml无菌水至斜面，用接种环轻轻刮下孢子，轻轻振荡制成孢子悬浮液。 ℃摇床培养d，摇床转速0 rpm。制成种子液。 4．发酵：无菌操作（不要在无菌室），取发酵培养基（液）3瓶，。摇床转速0 rpm，℃摇床培养d，另1瓶不接种留作对照。观察发酵过程中pH的变化并记录．发酵液预处理 取发酵液经过滤?，。 . 效价测定 标准曲线法： （1）倒平板：将LB琼脂培养基熔化后，倒平板，每个倒15 mL； （2）涂平板：无菌操作吸取37℃培养了18 h的0.1 mL金黄色葡萄球菌菌液加入到上述平板，用无菌三角涂棒涂布均匀。 （3）标记：将上述平板皿底用记号笔分成4-6等份，分别标明红霉素标准浓度（1.5×10-4、1.5×10-5、1.5×10-6、1.5×10-7、1.5×10-8mg/mL）。 （4）贴滤纸片：无菌操作，用镊子取无菌滤纸片分别浸入5种不同浓度（（1.5×10-4、1.5×10-5、1.5×10-6、1.5×10-7、1.5×10-8mg/mL）的红霉素溶液中，在容器内沥干余液，再将滤纸片分别贴在平板上相应位置，在平板中央贴上浸有发酵液滤液的滤纸。平行做3个培养面。 （5）培养、观察：将上述平板倒置于37℃，培养24 h，观察并记录抑菌圈的大小，并计算红霉素发酵液的浓度 五、实验结果与与讨论 并对菌种能力进行评定。 3定性分析 1. 红霉素结构式：