沼泽红假单胞菌的分类鉴定和生理特性.docVIP

沼泽红假单胞菌的分类鉴定和生理特性 摘要采用改良的Hungate厌氧培养技术一滚管法,从淀粉厂的污泥中,分离得到一株革兰氏阴性,弯曲杆状,出芽繁殖,既能在光照厌氧,也能在黑暗好氧条件下生活的光能异养型Y6菌株.经形态观察、生理特性的测定,确证Y6菌株为沼泽红假单胞菌(Rhodopseudpmonaspalustris).关键词:紫色非硫光合细菌,沼泽红假单胞菌,厌氧培养技术 利用光合细菌净化高浓度有机废水,己是废水生物处理法中的一个重要方法.它具有 有机负荷高,占地面积小,投资费用少,动力消耗低,除氮效果好和耐盐能力强等优点. 同时,产生的菌体污泥是优质的饲料和肥料,可加以综合利用.因此,近几年来用光合细 菌法(PSB)净化废水正受到人们的广泛重视. 目前,用于有机废水净化的光合细菌,主要是紫色非硫细菌红螺菌科 (Rhodo‘Pi({llaceac)的一些菌株·这些菌一般均为兼性光合细菌·应用于有机废水净化的 菌株,要求对有机质有较强的代谢能力和较高的耐受性,对不良环境因素,如温度、pH 和盐度等有较强的适应性. 为了进一步开展紫色非硫细菌在净化有机废水中的应用研究,我们从淀粉厂污泥中分 离到一株光能异养型Y6菌株.经初步测试,表明具有利用基质广泛、生长速度快、耐受 有机质浓度较高等特点.经鉴定确认,Y‘菌株为沼泽红假单胞菌 (Rhodo脾udomonas尸alustr哟.现将分离鉴定结果和某些生理特性报导如下. 材料和方法 . 1菌株来源 Y6菌株从济南市槐荫区淀粉厂污水排放沟污泥中分离获得. . 2培养基 vanNiel培养基〔‘〕 Molisch琼脂培养基〔2〕 YP琼脂培养基〔,〕 RCVBN培养基〔3〕 , 3菌种分离和纯化 *收稿口期:1990一l!一16第3期于温旭等:紫色非硫光合细菌的研究·345· 取污泥样品在VanNiel培养基中富集培养,30℃,Zo00Lx光照厌氧培养3一4天 后,培养基呈绛红色.再经4次连续转接培养,使光合细菌的生长在富集液中占绝对优 势,然后采用改良Hungat。厌氧培养技术一注滚管法闭进行分离纯化.待长出单个红色 菌落后挑取菌落穿刺接人Molish琼脂杜内保存,或再用YP培养基平板反复划线分离, 取得纯培养物. 1.4碳源和电子供体、氨基酸利用试验 在每支装有sml琼脂基础培养基试管中分别加人0.2%浓度的各种碳源和电子供 体:或在每支装有sml不含氮源的基础培养基试管中,分别加人0.01%浓度的各类氨基 酸.试验均采用穿刺法,并置于28℃,1000Lx厌氧光照培养3天. 1.5完整菌体和离体光合色素吸收光谱的检测 活细胞吸收光谱测定,用60%蔗糖溶液制成菌体悬液:离体光合色素吸收光谱测 定,以超声波碎破,得红色无细胞抽提液.均用Uv一240型分光光度计扫描,波长范围 300~900nm. 1.‘生长曲线的测定 分别在厌氧和微好氧(120r/min)条件下,以RcvBN液体培养基接种2%菌液, 28℃,1000Lx光照培养,定时在680nm处测定o.D值,绘制生长曲线,由生长曲线可 得出菌的倍增时间. 1.7酵母膏对菌体生长的影响 用不同浓度酵 一 母膏代替生长因子,定期在68onm处测定OD值,并于培养48h后离 心、烘干称重计算菌休得率. 1.8菌体对乙酸钠和谷氨酸钠的耐受性试验 以不同浓度的乙酸钠溶液代替RCVBN培养基中的苹果酸为碳源:或以不同浓度的 谷氨酸钠为RCVBN培养基中的氮源,均置于28℃,Z000Lx厌氧光照培养,定时测定 680nm处0.D值. 1.9菌种鉴定方法 主要根据Borgcy氏“细菌鉴定手册’夕第八版〔’〕,以及有关文献〔‘,’〕进行. ,冷二卜甲… 山二目刁、 2.1形态特征 纯培养物菌株Y‘为革兰氏阴性反应.细胞呈杆状,稍有弯曲,形态多变,大小不均( 图l),菌体大小为0.7一0.9X1.1一2.6拼m,有极生或亚极生单鞭毛(图2).出芽繁 殖,先在鞭毛着生相对端膨大,使细胞呈哑铃状,然后形成芽体,与原菌体分离.老龄菌 体聚集,常呈玫瑰花饰状(图3). 2.2拾养特征 菌株Y6在光照厌氧条件下生长很快.在RCvBN培养液中,初期菌液呈红色至鲜红 色,后期转为红褐色,老培养物形成均质易扩散的沉淀;在RCVBN琼脂斜面上,菌落 圆而小,呈鲜红至暗红.在黑暗好氧条件下,用YP培养基平板培养时,生长旺盛,菌苔 明亮,无色至鲜红色.· 346·山东大学学报〔自然科学版)第26卷 2.3碳源和电子供体、氨基酸的利用 试验结果表明,Y。菌株对碳源的利用较为广泛.许多有机物都可作为碳源,且以乙 酸钠、丁酸钠、甘油、丙酮酸和苹果酸等对生长更为有刊(表l):氮源试验证明,谷氨酸 钠和丙氨酸对菌体生长有促进作用(表2). 表1Y6菌株对碳源和电子供体的利用 Table