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分子遗传标记及其在畜牧业中应用 杨永栋，张 璞，王子雄，王彦贵，李志刚，潘从寿 甘肃农业大学动物科学技术学院 甘肃 兰州 730070 E-mail: yyd88@126.com 摘 要：近年来, 随着生物技术发展, 分子遗传标记技术获得了迅速发展, 文章系统介绍了 分子遗传标记技术和概述了分子遗传标记在畜牧中的应用远景。 关键词：遗传标记 多态性 动物育种 1. 分子遗传标记技术概述 20 世纪70 年代,科学家发展了DNA 重组技术,而已在试管内操作基因,改造基因,甚至再 分子水平上创造新的生命个体和物种,这些技术为改造作物和家畜品种的改良提供了新的有 效手段.80 年代以来.随着PCR 技术和新的电泳技术的产生，各种分子标记业随之发展起来， 给动物育种方面带来了更新的生机和革命性的变化。 2. 常见分子标记的介绍 目前常用的有：限制性片段长度多态性(ＲｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎＦｒａｇｍｅｎｔＬｅｎｇｔｈＰｏｌｙｍｏｒ ｐｈｉｓｍｓ, ＲＦＬＰｓ)[ 1]、随机引物扩增多态性ＤＮＡ(ＲａｎｄｏｍＡｍｐｌｉｆｉｅｄＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ,ＲＡＰＤ)[2]、 微卫星ＤＮＡ(ＭｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅＤＮＡ)[3]、扩增片段长度多态性(ＡｍｐｌｉｆｉｅｄＦｒａｇｍｅｎｔＬｅｎｇｔｈＰ ｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ,ＡＦＬＰ)[4]和单核苷酸多态性(ＳｉｎｇｌｅＮｕｃｌｅｏｔｉｄｅＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ,ＳＮＰ)[5]标记 等。 2.1 RFLP 标记 20 世纪70 年代中期，遗传学家发现了现象，至今仍被广泛应用。其基本原理是利用限 制性内切酶酶切不同个体基因组DNA 后，与同位素或非同位素探针标记杂交，从而显示于 探针含同源顺序的酶切片片段在长度上的差异[6].RFLP 探针的来源主要是RG 克隆和cDNA 克隆，其中cDNA 探针保守性很强，许多同科物种cDNA 探针都可以通用探针。 2.1.1 RFLP 在绵羊，山羊育种上的应用 RFLP 在绵，山羊育种上的应用报道比较多。S.Hiendleder 等利用RFLP 技术对绵羊线粒 体DNA(mtDNA)进行研究。结果发现，世界范围内的绵羊存在2 种类型，称为野生型和突 变性，并且存在于品种内和品种间[7] 。李祥龙等利用18 种限制内切酶分析了5 个山羊品种 MTDNA 多态型。结果表明，国内2 个山羊品种间具有较近的亲缘关系，欧洲品种和非洲3 个品种间亲缘关系较近[8]。 2.2 AFLP 标记 AFLP 的基本原理是对基因组总DNA 酶切后经PCR 技术进行选择性扩增[9] 。AFLP 有 这样一些特点：1.DNA 需要量少；2.多态性丰富，可重复性好；3.样品适应性广，结果稳定 性好。 2.2.1 AFLP 的应用 AFLP 在目前的应用：1.在生物多样性中将AFLP 广泛应用到那些无法通过形态性特征 区别的分子标记解决的家系或近缘物种与系统发生关系研究中。孙易 （2000 ）等对来自 15 -1- 个种及品系卤虫的AFLP 分析显示了非常好的遗传多态性。采用 12 条引物检测到594 条带， 其中480 条为多态性标记，从AFLP 聚类图中可看出沿海与内陆的孤雌卤虫明显被分为两群 [10] 2.构造遗传图谱。Otsen （1996 ）等在小鼠连锁图上定位了318 个AFLP 标记，研究了 RI 家系中一些血压显性型与AFLP 标记基因型的关系，并将两个相关AFLP 标记定位在20 号染色体上。 2.3 微卫星（Microsatellite ）标记 微卫星标记是一类由几个核苷酸（一般不超过4 个）为重复单位组成的长达几十个核苷 酸的串联重复序列[11]。也称之为简单重复序列，短串联重复序列或简单序列长度多态性。 微卫星 DNA 广泛存在于真核基因组中，大约每隔 10~ 15bp 就有一个微卫星。微卫星 DNA 标记一般不能直接作为探针，而须将其