16S+rRNA甲基化酶在氨基糖苷类抗生素高度耐药革兰阴性菌中分布地研究.pdfVIP

参评青年优秀论文 317 16S枞甲基化酶在氨基糖苷类抗生素高度耐药革兰阴性菌中分布的研究 周颖杰， 余 慧， 徐晓刚， 叶信予， 吴 浞， 郭 燕， 王明贵 复旦大学附属华山医院抗生素研究所 摘要：目的2003年来，革兰阴性菌中相继发现6种编码16srRNA甲基化酶的基因，该基因介导对大部分氨基糖苷类 抗生素高度耐药。这些甲基化酶的分布在不同菌种和不同地区有所不同。方法收集2007年上海1所三级甲等医院对阿米 卡星和庆大霉素耐药的革兰阴性菌。药敏试验采用纸片法。通过PCR检测6种甲基化酶基因，分别为n瑚A．rm组，朋￡B， r舢}c，r柳D和以户mA。采用ERIc—PCR对16SrRNA甲基化酶基因阳性的菌株做同源性分析。结果741株革兰阴性菌中， mm)，12株呈低水平耐药(阿米卡星抑菌圈为7～12mm，庆大霉素抑菌圈为7～14 mm)。217株高度耐药菌中包括：66株肺 炎克雷伯菌，60株鲍曼不动杆菌，44株铜绿假单胞菌，12株粘滞沙雷菌，11株奇异变形杆菌，10株大肠埃希菌和14株其他细 菌。在这些高度耐药菌中，199(91．7％)株被检出含有16S 隆，57株鲍曼不动杆菌分7个克隆，2株摩根摩根菌分2个克隆，4株弗劳地柠檬酸杆菌和2株产酸克雷伯菌分别为1个克 隆。结论上海地区革兰阴性菌对氨基糖苷类抗生素耐药率较高。在高度耐药的菌株中，大部分可以检测到n胤A和朋培 基因。该类基因可以水平和垂直传播。 16S 关键词：氨基糖苷类； 耐药； rRNA甲基化酶 氨基糖苷类抗生素通过作用于细菌核糖体，抑制其蛋白质合成，从而破坏其细胞膜完整性而杀灭细菌。 由于这类药物具杀菌作用，抗菌谱广、有较长的抗生素后效应，与其他抗菌药物有协同作用，目前是治疗革兰 阳性及阴性菌感染，尤其是耐多药革兰阴性菌感染的常用联合治疗药物。但是，随着这类药物的临床应用， 细菌对其耐药率也持续上升。细菌对氨基糖苷类抗生素的耐药机制主要有3种：①细菌外膜蛋白通透性改 变或细胞内膜转运异常，使药物在菌体内的蓄积减少；②产生氨基糖苷类钝化酶包括氨基糖苷类乙酰转移 酶、磷酸转移酶及核苷转移酶；③核糖体蛋白或16SrRNA突变，使药物作用靶位改变，药物进入细菌后不能 有效地与核糖体结合而产生耐药。过去认为，产生钝化酶是最常见的耐药机制，钝化酶仅引起细菌对该类药 抗生素低度耐药，且钝化酶具有底物特异性，细菌对氨基糖苷类抗生素不同品种呈现不完全交叉耐药。 rRNA 2003年法国学者在临床分离的耐多药肺炎克雷伯菌中发现了1种由质粒介导的耐药机制一16S rRNA 甲基化酶(16S Methylase)，该酶导致革兰阴性杆菌对卡那霉素组和庆大霉素组的多种临床常用氨基 糖苷类抗生素高度耐药。目前已发现的16S 口rmA。在多个国家和地区的多种革兰阴性杆菌中陆续检测到该类耐药基因。这些基因位于质粒或转座子 上，易于传播，是造成细菌对氨基糖苷类耐药的重要原因。 我国，猪中分离到的大肠埃希菌和阴沟肠杆菌中检测到rm￡B基因，对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌中 检测到口mA基因。然而，氨基糖苷类耐药的临床分离革兰阴性菌中的16SrRNA甲基化酶分布的研究较 少。 本研究对华山医院临床分离的氨基糖苷类抗生素耐药的革兰阴性菌进行16SrRNA甲基化酶的检测。 材料与方法 一、临床分离细菌和细菌药敏测定 318 参评青年优秀论文 收集华山医院(三级甲等医院，床位数1 l’Etoile，France)。 临床革兰阴性菌。菌种鉴定采用VITEK“’系统(bioMerieux，Marcy 2()07年版。选取其中对阿米卡星和庆大霉素耐 细菌药敏试验采用纸片法，操作和结果判读根据CLSI 药的非重复菌株进行PCR检测。