microRNA检测方法的研究进展.pdfVIP

江苏农业科学2013年第4l卷第9期 韦荣昌，赵欢，马小军，等．microRNA检测方法的研究进展[J]．江苏农业科学，2013，41(9)：17—19 microRNA检测方法的研究进展 韦荣昌1”，赵欢2，马小军1’2’3，唐其1，韦树根1’2，覃喜军2，涂冬萍2 (1．广西药用植物园，广西南宁530023；2．中国医学科学院＆北京协和医学院药用植物研究所，北京100193； 3．中国医学科学院药用植物研究所云南分所，云南景洪666100) 的表达，对不同的生理和病理过程起重要的调控作用。准确而灵敏地检测组织或细胞中miRNA的表达水平，可为研 究其功能鉴定和作用机制提供帮助。本文就近年来有关miRNA检测方法的研究进展作一综述。 关键词：microRNA；检测方法；研究进展 中图分类号：Q789文献标志码：A 文章编号：1002—1302【2013)09-0017—03 1．2 PAGE／Northetn microRNA(miRNA)是一类长约22个核苷酸(nt)的内源blotting 性非编码小分子单链RNA，普遍存在于各种动植物中，由长 PAGE／Norhtern 约70nt的具有茎环结构的pre—miRNA(precursor的方法¨。，所有克隆和生物信息学分析得到的miRNA都必须 经过PAGE／Norhtem microRNA)剪切而来，在进化上具有高度的保守性、时序性和 组织特异性。miRNA通过与靶基因mRNA3’非翻译区 (3’UTR)相互作用在转录后水平上调控mRNA的翻译，进而金标记反义寡核苷酸5’末端作为探针，这个过程简便快速。 广泛作用于发育、细胞分化、细胞凋亡、脂类代谢和激素分泌 这种方法的缺点是样品的需求量大，灵敏度低且不能进行高 等多种生理过程u1以及炎症、肿瘤、白血病、糖尿病等多种病 通量的检测。目前，用锁定的核苷酸探针(LNA)来取代传统 理过程。然而，由于研究方法的单一或缺乏，绝大多数miR— NA的功能和作用机制尚不清楚，因此，有效而且适用的试验 度和特异性。LNA是一种寡核苷酸衍生物，具有高亲和性， 技术和生物信息学方法，对研究miRNA的功能及其参与的生可掺入到DNA中的任何位置，含有LNA的探针与靶分子结 物学过程具有十分重要的意义。 合后的双链热稳定性提高。基于LNA的探针杂交技术已被 广泛应用于miRNA的检测(包括原位检测)中¨。”J。 1 miRNA检测的试验技术 1．3微阵列芯片 1．1 miRNA克隆 迄今为止，cDNA克隆仍不失为一种寻找新miRNA的有 样本，实现所有已知miRNA表达谱的高通量分析o7’”1。该方 效手段，大部分已知靶基因的miRNA都是通过直接克隆发现法即在一块芯片上同时固定多个与miRNA序列互补的探针， 和鉴定的旧‘51。小RNA的克隆首先利用PAGE分离目的组加入经过标记的样本RNA并杂交，最后进行信号检测。但微 织或细胞中约22nt的RNA，并连接到5’和37的适配子上，逆 阵列芯片仍避免不了假阳性问题，杂交后的处理步骤中，洗涤 转录并通过PCR扩增获得miRNA的cDNA文库，然后对这些条件不同对检测结果有很大的影响，故所得信息需要经过 扩增产物进行克隆、测序，并与基因组数据库BLAST比对，排PAGE／Northern PCR等技术加以确认 blotting、real—time 方可㈣。 除非miRNA后，最后通过PAGE／Northernblotting予以 验证‘”1。