II型限制性核酸内切酶在真核生物染色体显带中的应用.pdfVIP

＿（Beijing）12(6) 39- 41 1990 滇倩 HEREDITAS（ II型限制性核酸内切酶在真核生物 染色体显带中的应用 熊治廷 王有为 （中国科学院武汉植物研究所，430074) 一、引言 理非洲绿猴“’，印度鹿 ，〔’，家鼠 「”‘和家鸡 川〔染色休 限制性核酸内切酶 简（称限制酶乡能切割DNA双 后，可同时显着丝点C带和G带。目前发现能同时诱 链。已知的限制酶有 I,1I和III型三类。II型限制酶 导C带和G带的限制酶主要是 AluI和HaeIII，其 能识别专一核普酸序列，并在识别序列内有固定切割 他酶类效果的稳定性和可重复性有待进一步检验。 点，是分子生物学研究和基因工程重要工具酶J1980 某些限制酶对染色体核仁组成区 N（OR）有选择 年，以II型限制酶处理印度鹿染色体，沿染色体纵轴得 性消化作用。Miller等 z〔”首先在人和小鼠染色体上 到选择消化结果 ’〔’‘。目前，限制酶这一应用研究发展 注意到此种现象。最近在两栖类中也有典型的实例报 成称为限制性核酸内切酶显带 R（estrictionendonucl- 道’〔’“。有时NOR不能抵抗两种酶的相继处理川〔。 easebanding）的最新显带技术，已应用于哺乳类、鸟 对黑腹果蝇多线染色体研究表明，5SDNA对不同酶 类、两栖类、鱼类和昆虫等真核生物。限制酶显带与其 处理有不同反应：能抵抗 AluI的消化，但是对Hae 他显带法相比有其特点，特别在揭示异染色质的异质 川敏感[2010 性方面有其独到之处。本文介绍此项技术的发展与现 限制酶诱导发生的带型类别与生物类群的进化水 状，并指出需要进一步探索的几个主要方面。 平有密切关系。昆虫和冷血动物染色体经限制酶处理 二、限制酶显带的发生及特点 仅显C带，温血动物则可显C带和G带。因此，系统发 染色体的限制酶显带是在其他显带法基础上发展 生处于较高阶段的生物类群常能由限制酶诱导产生较 起来的，实验程序与其他显带方法基本相似。目前已 复杂的带型；反之，带型比较简单。这种现象与常规显 在20余种真核生物体细胞染色体上试验了30多种 II 带结果有惊人的一致性。大量常规显带研究表明，C 型限制酶的显带效果。 这些生物种类有： 人4〔-7,10, 带是真核生物中普遍存在的带型，G带一般只发生在 ．24-77,303，类人猿’〔，”’，非洲绿猴 〔’‘，印度鹿，「，，‘川，中 温血动物中。这种一致性一方面反映出限制酶显带与 国仓鼠 〔’‘，家鼠 〔，‘”，，”’．’，家鸡 ’〔。’，蟾蛛’〔。’，蛙[301嵘 传统显带在机理上的某些共同点，另一方面意味着带 螺1303，虹缚”〔’，蝗虫 ”〔’，果蝇120,333，蚊子 ’〔，’‘，”〕。 型类别制约于不同生物类群 DNA分子的组成特性。 已经试验过的生物类群染色体均能由限制酶诱导 有证据表明，染色体G带 或（R带）的出现直接与细胞 产生C带或（类C.带）。但限制酶C带与常规C带并不 核 DNA组成的异质性有关 ”〔”’。 总是完全一致的，有时甚至存在着明显的差异。在同 迄今未见限制酶应用于植物染色体显带的研究报 1种试材中，这种差异又因所用限制酶种类不同而异。在 道，原因尚不清楚。不过，早在1976年，Subrahmanyam 人类染色体1,9,16和Y上有很大的常规C带出现，经 等t32’用 HindII和 HindIII预处理大麦和鳞茎大 不同限制酶处理后，这些染色体的对应区域显示相同 麦根尖，细胞学检查发现，两种材料的中期染色体均被 的或部分相同的限制酶C带，或完全表现为负染4〔3。限 切割成许多片段，细胞核呈颗粒状。限制酶对植物染 制酶显带与常规显带的差异还表现在前者能揭示同源 色体的这种原位切割作用与对动物染色体的显带作用 染色体间的异质性，而这种异质性