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ISSR 分子标记技术在桃品种鉴定中的应用 1 1 1 1 1* 1 1 2 孙淑霞 ，李靖 ，陈栋 ，谢红江 ，江国良 ，涂美艳 ，鲜小林 ，彭春华 （1．四川省农业科学院园艺研究所，四川成都，610066；2. 成都市龙泉驿区农发局，成都 市龙泉驿区 610100） 摘 要:桃品种分子鉴定是种质资源研究和新品种保护的基础。本研究利用ISSR标记对 28份桃种质进 行了品种鉴定及亲缘关系检测。结果发现：23 条 ISSR 引物共扩增出 188 条 DNA 片段,其中 96 条具有多态 性,多态性频率为 51.06%;每个 ISSR 引物可扩增出 6～13 条 DNA 片段，平均 8.17 条;材料间遗传相似系数 GS变幅为0.84～0.97,平均为0.92。ISSR标记分子聚类图直观反映了品种间的差异，揭示了多数来源地相 同的种质表现出较为密切的亲缘关系。在供试的 5 份材料鉴定出 9 条特异出现 DNA 片段，在 9 份材料中鉴 定出 11 条特异缺失 DNA 片段，其中红碧桃鉴定出特异出现和特异缺失两种 DNA 片段。这 20 条特异 DNA 片 段可转化为 SCAR 或 SSR 标记，用于对相应品种及杂交后代指纹鉴定。该研究结果对桃种质资源的保存和 利用，新品种的登记、注册及产权保护具有重要意义。 关键词: 桃; ISSR; 品种鉴定; 指纹图谱 桃[prunus persica(L.)Batseh.]属于蔷薇科(Rasaceae) 桃属(Prunus)，原产于中国，具有丰 富的种质资源。桃为多年生作物，多采用嫁接繁殖，新老品种数量繁多，且不同地域经常交 换，极易造成同名异物及同物异名现象，仅依靠传统的形态特征很难识别，而 DNA 指纹图 谱能从本质上反映生物个体差异，具有高度个体特异性和稳定可靠性。高质量指纹图谱可作 为新品种登记、注册和产权保护的重要依据。 目前，利用分子标记对桃种质进行品种鉴定的研究还未见有报道，在其他果树上这方面 Martins （2008 ）利用RAPD 和 SSR 标记对葡萄牙当地和引进的橄榄树 的研究也少之又少。 种质资源进行了遗传多样性及品种鉴定研究。Barysheba 等（2003 ）通过对欧亚种一些葡萄 品种的 RFLP 研究,获得一系列可以作为品种鉴定基础的 DNA 位点。ISSR (inter-simple sequence repeat)标记是基于简单序列而设计的寡核苷酸序列引物，是一种以 PCR 扩增为基础 的分子标记技术，谱带丰富，作为随机引物广泛应用于不同基因组序列的物种鉴定中。本研 究首次利用 ISSR 标记对来自国外和国内 28 份桃种质进行品种鉴定分析，以期为桃种质资 源的研究利用提供参考。 1 材料与方法 1.1 材料与 DNA 提取 供试材料达 60 余份,均来自于四川省农业科学院园艺研究所中江桃品种园，其中 28 份 用于品种鉴定分析，另外 30 余份用于对特殊条带检验。部分字母编号为国外引进或名称混 淆材料。基因组 DNA 的提取参照Doyle 等(1990)改良的 CTAB 法,并稍加改进。新鲜幼叶在 液氮研磨后将磨碎的材料移入 5mL 离心管中,加入 3 mL 65℃预热的 CTAB 提取液 [100mmol/L Tris-HCL,20mmol/L EDTA,1.4mol/L NaCl (M/V),2.5%CTAB (M/V), 2%PVP (M/V), 2%(V/V)β-巯基乙醇（随用随加）] 。摇匀, 65℃水浴45min ，期间轻轻摇匀 3 次。加 233 入 2ml 酚：氯仿：异戊醇（25:24:1 ），上清液再加入等体积氯仿：异戊醇（24:1 ）,得到的 DNA 用 TE 溶解后再重复以上步骤加以纯化。 1.2 引物筛选与 PCR 扩增 所用 ISSR 引物参照加拿大哥伦比亚大学 UBC 公司公布的第 9