PCR_DGGE技术在农村户用沼气发酵微生物研究中的初步应用_师晓爽.pdfVIP

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2017-08-21 发布于重庆
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PCR_DGGE技术在农村户用沼气发酵微生物研究中的初步应用_师晓爽.pdf

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PCR_DGGE技术在农村户用沼气发酵微生物研究中的初步应用_师晓爽.pdf

2007 6 ( ) Jun.2007 22 2 Journal of Shandong Normal University(Natural Science) Vol. 22 No. 2 P R- DGGE * 1), 2) 1) 2) 2) 2) 2) * * 师晓爽刘德立郎志宏黄大陆伟李敏 ( 1) ,430079, ; 2) , 100081, 24, , ) P R- DGGE , , 1345 , DNA, 16S rDNA V3, DGGE( ) , , DGGE . DGGE 16S rDNA V3 , N BI ,. : , , , , , DGGE 16S rDNA . ( DGGE) ; ; ; Q 938. 1 ,, . , , , , ,. ,99% [ 1] , . ( denaturing gradient gelelectrophoresis,DGGE) [2] 20 80 ,16S rDNA , , . [ 3] ,. P R- DGGE, ,, . 1 1. 1 , . 2006 134 5, 4 , 12h . 1.2 [4] 1.2. 1 DNA 提取 DNA , . ( V- gene P R lean- up KIT) . 1.2.2 16S rDNA V3 可变区的扩增 [ 2] 16S rDNA V3 : P1: 5- G G G G G GG GGG GGGG GGGGG A GGGGGG TA GGGAGG AG AG- 3 P2: 5- ATTA G GG TG TGG- 3,P1G , DGGE 2+ ,. P R P R , :2. 5 l10 P R buffer (Mg free) ,2.0l Mg l ( 25mmol L) , 2.0 l dNTPs(2.5mmol L) , 0. 1l(50 pmolL) , 1 U Ex Tag ( 5U/lTakaRa) ,DNA 1l 2 ( 1ng) , 25 l. 94 5min,94 30 s,65 ~ 55 30 s(65 56 , 1 , 55 5 ) , 72 1 min 25 , 72 6 min, 1.2%. [ 5,6] 2+ P R , Reconditioning P R P R : :5 l 10 buffer(Mg 2+ free) , 4l Mg (25 mmol L) ,4 l dNTPs(25 mmolL) , 0.2 l(50 pmol L) , Ex Tag 2U(5 UlTaKaRa) ,P R 5 l, 50 l. :94 5min; 94 1 min,55 1 min,72 1 min,5 ; 72 10 min. 1.2%. TM 1.2.3 DGGE Reconditioning P R