以葡萄糖为唯一碳源合成聚-4-羟基丁酸的重组大肠杆菌的构建.pdfVIP

45卷3期 微 生 物 学 报 V01．45No．3 2005年6月 Ac缸肘切曲捌b咖口胁i阳 June 2005 以葡萄糖为唯一碳源合成聚．4．羟基丁酸的重组大肠杆菌的构建 宋水山1’2 马 宏1 高振贤1 贾振华1 张 霞1 (1河北省生物研究所石家庄050051) (2河北农业大学生命科学学院保定0r71001) 摘要：为实现重组大肠杆菌以葡萄糖为唯一碳源合成均聚的P(4HB)，PCR扩增大肠杆菌编码谷氨酸：琥珀酰半 带重组质粒的大肠杆菌获得从三羧酸循环的中间物——a．酮戊二酸到P(4HB)的代谢途径。结果表明，重组大肠杆 菌可以以葡萄糖为唯一碳源合成均聚的P(4HB)，当向以葡萄糖为唯一碳源的无机培养基添加蛋白胨、酵母提取 物、酪蛋白水解物时，P(4HB)的含量可以高达菌体干重的30％。 关键词：聚羟基烷酸，聚．4羟基丁酸，代谢工程，重组大肠杆菌 中图分类号：Q93 文献标识码：A 文章编号：0001．6209(2005)03一0382．05 聚羟基烷酸(P01yhydroxyalkanoate，简称PHA)是 一类由许多原核生物在非平衡生长条件(如缺氮、 磷、氧、铁等)下在胞内积累的碳源和能源储存物质， 在自然界中可被微生物完全降解，并具有热可塑性， 生物相容性，光学活性，和压电特性等。因此，PHA 作为生物全降解塑料被认为是解决由大量废弃塑料 造成的环境污染的希望，而且PHA作为一种新型生 罐规模上分批补料培养该重组大肠杆菌获得一定量 物工程材料，在医学、药学、精细化工中也极具应用 的P(4HB)。 前景‘1I。 acid，简称P体物质，即4．羟基丁酸。而4．羟基丁酸又非常昂贵， 聚．3．羟基丁酸[Poly一3一hydroxybutyric (3HB)]是PHA中最常见的一种，在工业上已有小批 量生产。但由于P(3HB)的某些理化加工性能不尽(4HB)的生产和利用。本研究旨在构建从三羧酸循 人意，如质地脆、发硬，难于加工，其应用范围和价值 受到了很大的限制b1。Mukai等”o发现，若P(3HB)(图1)，克隆所有必需的基因，将其组装在一起，转 聚合物中引入4一羟基丁酸(简称4HB)形成聚一3一羟化大肠杆菌，实现使重组大肠杆菌以葡萄糖为唯一 基丁酸．co．4一羟基丁酸共聚物[P(3HB．co．4HB)]，则 可以改良聚合物的特性。初步研究表明，与p(3HB)低P(4HB)的生产成本。 均聚物相比，均聚的聚4一羟基丁酸[简称P(4HB)]除 1材料和方法 具有P(3HB)的优良特性外，还具有韧性强[断裂伸 1．1材料 长强度为P(3HB)的200倍]，溶点低(仅为50℃)，易 1．1．1菌株和质粒：本研究所用微生物菌株和质粒 进行后期加工等优点。另外，P(4HB)更容易被生物 体内的脂肪酶或酯酶降解，可用于制造医学工程塑 料。因此，P(4HB)比P(3HB)更具有应用前景和开 斯特大学微生物所AlexaJlder 发价值。Hein等。61构建了携带富养罗尔斯通氏菌 基金项目：河北省自然科学基金资助项目(303610) 收稿日期：2004—10—11。修回日期：2005．01．10 万方数据 3期 宋水山等：以葡萄糖为唯一碳源合成聚．4．羟基丁酸的重组大肠杆菌的构建 383 91ucose j ￡。 Ⅱ船蚓曲。把 {、H箩H、H爿∥H≮H罗H：、s} ”鬯眦啦…+暖00一