人工miRNA簇表达载体的构建及检测.pdfVIP

2·94 · 安徽医科大学学报 　A cta Un ivers ita tis M ed icina lis A nhu i　20 10 Jun; 45 ( 3) 人工 m iRNA 簇表达载体的构建及检测 1 2 1 2 李纪鹏 ,付汉江 ,秦宜德 ,郑晓飞 摘要 　目的　构建人工 m iRNA 表达簇 ,并研究 m iRNA 的加 系列荧光素酶报告基因载体为 Prom ega 公司产品。 工对蛋白质表达水平的影响 。方法 　从 m iRNA 表达库中扩 m iRNA 表达质粒库 由本室 自行构建 , 大肠杆 菌 增 m iR 234 a及 m iR 2424 的前体序列 ,将上述两种 m iRNA 串 JM 109和肝癌细胞株 H ep G2 均为本室保存 。荧光 联 ,构建 PGL 234 a2424 人工 m iRNA 簇表达载体 。通过 R T2 素酶检测试剂盒和 Im Prom 2ⅡTM 反转录酶为 Pro2 PCR 的方法检测人工 m iRNA 簇的表达情况 。然后将 m iRNA m ega公司产品。总 RNA 分离试剂 TR Izo l为 Sigm a 前体突变 ,再用荧光素酶报告基因技术研究 m iRNA 的加工 对蛋白质表达的影响 。结果 　成功构建人工 m iRNA 簇表达 公司产品。转染试剂 FuGEN E HD Tran sfection R e2 载体 ,荧光素酶实验显示 m iRNA 的加工能够抑制蛋白的表 agen t为罗 氏公司产 品。DNA 限制性 内切酶 、T4 达 。结论 　人工 m iRNA 表达簇能够高效表达 , m iRNA 的加 DNA 连接酶 、Taq 酶为 TakaR a 公司产品。DNA 回 工对蛋白质的表达有抑制作用 。 收试剂盒为 T IAN GEN 公司产品。DM EM 培养基和 主题词 　微 RNA s;遗传载体 ;基因表达 胎牛血清为 GibcoBRL 公司产品。SYBR ExTaq M ix 中图分类号 　R 394; R 977. 9 定量 PCR 试剂 、DL 2 000 DNA 分子量标准购 自大 文献标识码 A 文章编号 1000 - 1492 (20 10) 03 - 0294 - 04 连宝生物公司 。引物由 Invitrogen 公司合成 。 1. 2　方法 　　m iRNA 是一类在动植物细胞中广泛表达的小 1. 2. 1　人工 m iRNA 簇表达载体的构建 　依据 San2 分子非编码 RNA ( nocoding RNA , ncRNA ) ,大量证 ger m iRB a se 数据库收录的 m iRNA 数据 , 根据 p ri2 据表明 m iRNA 在细胞中起着调控基因表达的重要 [ 1 ] m iRNA 序列设计引物 ,在 p re2m iRNA