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第33 卷 分析化学 （FENXI HUAXUE ） 研究简报 第12 期 2005 年12 月 Chinese JournaI of AnaIyticaI Chemistry 1743 ~ 1746 核酸靶分子与某些中药成分的非共价作用研究 宋凤瑞 闫存玉 刘 宁 刘志强 刘淑莹＊ （中国科学院长春应用化学研究所新药研究实验室，长春 130022 ） 摘 要 选择与SARS 病毒相关的DNA 片段作为抗病毒药物筛选的靶分子，利用生物质谱技术，通过对该寡 聚去氧核苷酸分子与常见中药黄芪、穿心莲、刺五加、苦杏仁、牛蒡子、栀子、菘蓝（板蓝根、大青叶）及厚朴中 的主要化学成分———黄芪甲苷、苦杏仁苷、穿心莲内酯、栀子苷、紫丁香苷、牛蒡子苷、靛蓝、靛玉红、厚朴酚及 和厚朴酚的相互作用研究，发现与寡聚去氧核苷酸的作用强度顺序为：黄芪甲苷 苦杏仁苷 穿心莲内酯 栀子苷 紫丁香苷 牛蒡子苷、靛玉红、靛蓝、厚扑酚及和厚朴酚与寡聚去氧核苷酸没有复合物形成。还研究 了黄芪甲苷与3 种脱氧核苷的相互作用。本方法作为药物筛选具有一定的可行性。 关键词 寡聚去氧核苷酸，中药，非共价作用，电喷雾质谱 ! 引 言 近20 年来，现代生物技术的崛起把新药开发推入革命性阶段。生物大分子及其相互作用的研究对 于阐明疾病发生的机理、发现药物新靶点、建立基于药物作用靶点的药物筛选模型等起到了关键的推动 作用［1，2 ］。其中，电喷雾电离质谱作为一种软电离手段，能够将溶液中生物分子与药物分子的非共价复 合物转入到气相进行分析，真实地再现其生理状态。同时由于具有快速、灵敏、特异及化学计量的几大 特点，使其成为在分子水平上进行药物筛选的最佳方法之一［3 ~ 8 ］，也是在分子水平上筛选中药抗病毒活 性成分的理想工具。实验选择与SARS 病毒聚合酶相关的寡聚去氧核苷酸分子（DNA 片段）作为抗病 毒药物筛选的靶分子，选择8 种在临床实践中证实有不同程度抗病毒活性的常见中药的10 种主要化学 成分，利用电喷雾质谱技术，通过对靶分子与这10 种中药成分的非共价复合作用的研究，探讨生物质谱 方法作为药物筛选方法的可行性。 # 实验部分 # . ! 实验材料与样品制备 寡聚去氧核苷酸分子（大DNA ）由15 个碱基组成，结构为5 -GGTAAGGAGAGC-3 ，分子量为4704 ， 系大连宝生物公司合成；脱氧鸟苷（CA ，MW = 251 ），脱氧腺苷（CG ，MW = 267 ），脱氧胞苷（CC ，MW = 227 ）购自美国Sigam 公司。所有中药对照品均购自中国药品生物制品检定所，结构式见式1 及式2 ；醋 酸铵、甲醇均为分析纯，购自美国Fisher 公司。 2004 -10-18 收稿；2005-08-19 接受 本文系国家自然科学基金（20 173057 ）和吉林省科技厅科技专项基金）资助项目 分析化学 第33 卷 1744 寡聚去氧核苷酸样品首先用20 mmOl / L 的醋酸铵配成1 mmOl / L 的储备溶液，中药对照品用甲醇配成3 mmOl / L 的储备液置- 20C 保存。实验前，取1 mmOl / L 的DNA 储备溶液5 !L ，用10 mmOl / L 的醋酸铵 稀释成10 !mOl / L ，取适量的浓度为3 mmOl / L 的中药对照品储备液，用10 mmOl / L 的醋酸铵/ 甲醇（60r 40 ）溶液稀释成10、30 和50 !mOl / L 。10 mmOl / L 的DNA 溶液分别与10、30 和50 !mOl / L 的中药对照品 溶液等体积高速混合后，进行电喷雾质谱分析。 脱氧鸟苷（dA ）、脱氧腺苷（dG ）、脱氧胞苷（dC ）用甲醇配成3