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T_载体的构建 马国达1，刘斯斯1．满朝来2。陈亮1 (1．黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院，黑龙江大庆163319；2．哈尔滨师范大学生命科学与技术学 院，黑龙江哈尔滨150080) 摘要：以peDNA3．1／v5一His为骨架载体．利用限制性内切酶EcoRV得到平端化的线性载体．在dTTP和Taq聚合酶 作用下。产生3’末端突出一个T碱基的T_载体。目的基因与T_载体连接。大肠杆茵转化。提取质粒进行酶切鉴定。结 果表明构建的T-载体成功克隆了目的基因片段，T-载体构建成功。 关键词：T一载体；构建；克隆 中图分类号：Q782 文献标识码：A 文章编号：1002-2767(2009)03—0006-02 MA Gua-dal。LIUSFsil．MANZhao-lai2。CHEN Lian91 Scienceand of FirstI矗ndReclamationUniversi— (1．Biological TechnologyCollegeHeilon西iangAugust 163319；2．LifeScienceand ofHarbinNormal ty，Daqing，Heilongjiang TechnologyCollege University， 150080) Harbin，Heilongjiang methodforconstructionofa direct withPCR wasdescribedin Abst嗡ct：A vector(T-vector)for cloning ligation products T-vectorfrom wastheskeletonwhichwasa vector this derived vector linear derivedre— pas,!；age．The pcDNA3．I／V5一His by striction EcoRVandobtaineda Twith dTTPand the with enzyme single 3’overhangingby Taqpolymerase．Afterligation destinationandT-vector。thetransformationof extractedwereconfirmedrestrictionendonuelease gene E．coli，plasmids by re．suitsshowedthattheconstructedT-vector clonedthedestination thecon— digestion，the successfully genefragment，and structionof was T-vectorsuccessful． KeyWOII蠡：T-vector；construction；cloning 下，得到3’末端突出一个T碱基的载体，即T-vector。 耐热DNA聚合酶引入pCR后，使其操作大大简 V 化，PCR自动化成为现实，这使PCR技术迅速而广泛由于在pcI)NA3．