鹅生长激素受体基因克隆及其个体发育性表达研究.pdfVIP

2008年第44卷第23期 Geneticsand 鹅生长激素受体基因克隆及其 个体发育性表达研究 李 馨1，肖翠红z，杨 隽-，颜国华t，刘国君， (1．黑龙江八一农垦大学动物科技学院，黑龙江大庆163319； 2．黑龙江八一农垦大学生命科技学院，黑龙江大庆 163319； 3．黑龙江省鹅育种中心，黑龙江齐齐哈尔 160015) mRNA在部分组织中的 了鹅GHR基因，并利用TaqMan实时荧光定量PCR．方法检测籽鹅出壳到90日龄GHR 表达量变化。结果表明：鹩与鸡和鸭的GHR基因核苷酸序列同源性为97．1％和99．1％，氨基酸同源性均为 99．1％。籽鹅肝组织中GHRmRNA表达水平在10到90日龄都较高，显著高于1日龄，以30日龄的表达量最高。 30日龄GHRmRNA在肝脏等检测的组织中都有表达，但在肝脏和骨骼肌中的表达量高。肝组织中GHRmRNA 表达量与日增重呈显著正相关(，=o．9116)。本实验结果揭示了生长期籽鹅组织中GHRmRNA表达水平的差异， 为进一步研究生长轴相关基因对鹅生长及繁殖的调控作用奠定基础。 关键词：生长激素受体基因；实时荧光定量PCR．；鹅 中图分类号：$835．2 文献标识码：B 动物的生长和发育受到许多因素的调节，外因 系。为进一步开展鹅生长轴相关基因的研究打下基 如环境和营养，内因如基因型、神经内分泌系统及代 础，同时为良种鹅的保种、品种选育和饲养管理提供 谢。生长激素(GH)是调节动物生长、发育等代谢过理论依据。 程的一个重要内分泌因子。GH在组织和细胞水平 1材料与方法 发挥作用的第一步是和靶细胞膜表面的生长激素受 1．1 体(GHR)结合，由GHR介导将信号传人细胞内从而实验动物与样品采集试验用鹅选自黑龙江 产生一系列的生理效应。Leung等川首次在兔的肝脏省鹅育种中心种鹅繁育基地孵化的1日龄健康籽鹅 eDNA文库中克隆出GHReDNA，随后人们相继克隆100只(公、母各半)。网上饲养，自由采食和饮水，持 出了人、猴、大鼠、小鼠、牛、猪、绵羊、鸡以及家鸽等 的GHR eDNA，并对GHR结构及其介导的信号转导8只，屠杀，迅速采取适量肝脏、胸肌、腿肌、卵巢、睾 途径和基因表达水平变化做了广泛的研究【刎。但是 丸、肌胃、肺、脾、垂体、肾及心等组织，立即置于液 关于鹅的GHR eDNA序列及其组织表达量变化尚氮中，然后转入一700C保存待用。 未见报道。 1．2试剂AMV反转录酶(10 本实验对鹅的GHR基因进行了克隆与序列分 剂(40 U／I山L)、 dNTPs(各2．5mmol／L)、DL2000 析，并将其与鸡和鸭的序列进行了比对。同时利用 DNA分子质量标准、 mRNA肪。尺I(4000 000 实时荧光定量PCR技术研究了出壳后GHR U／IzL)、HindIll(3 在籽鹅组织中的表达量变化，并分析其与生长的关 载体、琼脂糖凝胶回收试剂盒、质粒DNA提取试剂 RNA 盒均购自于大