pET原核表达手册(中文版)生物制药西部药学论坛poweredbyphpwind.pdfVIP

: [-- pET ( ) --] 查看完整版本 原核表达手册 中文版 - - pET ( ) [ - - - 西部药学论坛 生物制药 原核表达手册 中文版 打印本 登录 注册 回复主题 发表主 页] 题 红色法拉利 2006-06-01 21:50 ( ) 原核表达手册 中文版 可以说是原核表达宝典级读物,MERCK公司产品,让你对原核表达有个更深的认识,不错的东东，推荐大家读读 红色法拉利 2006-06-01 21:57 之所以首先介绍Novagen公司的产品是因为用过它的系列载 体，感觉很好用。Novagen的母公司是德国默克（Merck）公司，它是 国际著名的化学及制药公司总部位于德国 Darmstadt 300 55 28 62 的 ，已有 多年 的历史。已在全世界 个主要国家设立了分公司，其中在 个国家建 有 个生产 基地。 Novagen公司出品的系列载体是目前应用最为广泛的原核表达 系统，已经成功地在大肠杆菌中表达了各种各样的 T7 异源蛋白。系列 载体是利用大肠杆菌 噬菌体转录系统进行表达的载体，其表达原理 见下图。 T7 T7 噬菌体具有一套专一性非常强的转录体系，利用这一体系中的 元件为基础构建的表达系统称为 表达系统。 T7 T7RNA T7 RNA 噬菌体基因编码的 聚合酶选择性的激活 噬菌体启动子的转录。它是一种高活性的 聚合酶，其合 mRNA RNA 5 RNA 成 的速度比大肠杆菌 聚合酶快 倍左右。并可以转录某些不能被大肠杆菌 聚合酶有效转录的序列。 T7 RNA T7 T7 在细胞中存在 聚合酶和 噬菌体启动子的情形下，大肠杆菌宿主本身基因的 转录竞争不过 噬菌体转录 体系，最终受T7噬菌体启动子控制的基因 的转录能达到很高的水平。 T7噬菌体启动子的转录完全依赖于T7 RNA聚合酶，因此T7 RNA聚 合酶的转录调控模式就决定了表达系统的调 DE3 λ lacⅠ lacUV5 T7 RNA DNA 控方式。噬菌体 是 噬 菌体的衍生株，一段含有 ， 启动子和 聚合酶基因的 片段倍插 int DE3 BL21(DE3) HMS174(DE3) 入其 基因中，用噬菌体 的溶源菌，如 、 等作为表达载体的宿主菌，调控方式为 Lac 化学信号诱导型， 类似于 表达系统。 从开始涉及表达的时候可以根据是否要用基因本身的起始密码子 进行选择，Novagen公司仅提供三个载体：- 21(+)，-24(+)和 -23(+)。如果你打算利用载体的起始密码子，那么就有许多选择。 根据是否要可溶性表达，选择加