油菜的花药培养.ppt

Feb 12, 1998 Interface and Component Design with COM SD98 Session 4215 一、目的 了解和学习油菜花药培养技术。 二、内容说明 　　　油菜花药培养是获得单倍体的重要途径。如果利用杂种一代的花药培养，可将杂种一代的异质配子培育成单倍体小植株，经染色体加倍形成双单倍体纯合个体，经选择可以获得优异的材料，从而可缩短育种周期，提高育种效果。此外，花药培养可克服远缘杂种的不育性，可以在细胞水平或单倍体水平上作诱变处理，也能提高育种效果。 二、内容说明 　　　油菜花药培养有以下步骤： （1）花粉发育时期的选择， （2）诱导花药产生愈伤组织， （3）诱导愈伤组织进行器官分化， （4）小植株的移栽，形成花粉植株。 三、所需用品和操作方法（一）花粉发育时期的选择 1、用品：显微镜，培养皿，镊子，记载表。 操作台 （一）花粉发育时期的选择 2、主要作法： 在始花期选择油菜品种（或杂种）生长健壮的植株，取其主茎顶端蕾盘（即主花序，因花序未伸长而称蕾盘）或植株主茎上往下数5个第一次分枝顶端的蕾盘2-3个。每个蕾盘大致可分为三圈，外圈有15-25个花蕾，中圈有10-15个花蕾，内圈即花盘中间的一撮蕾。 据研究，油菜花药培养以取中圈花蕾最适宜，相应于此时期的花粉时期为单核期至双核期。 （一）花粉发育时期的选择 2、主要作法（续）： 分别取油菜主茎顶端花盘外、中、内圈花蕾，用醋酸地衣红或醋酸胭脂红涂抹制片，在显微镜下观察花粉发育时期，并接种在Miller培养基上，观察不同部位花蕾的花药产生愈伤组织百分率，填入表16-1中。 （一）花粉发育时期的选择 2、主要作法（续）： 表16-1 不同部位花蕾花粉发育时期和产生愈伤组织百分率 （二）诱导花药产生愈伤组织 1、用品（见下图）： 　镊子，小烧杯，接种针，75%酒精，新鲜的饱和漂白粉上清液或0.1%升汞溶液，蒸馏水，无菌水，超净工作台（或接种箱），酒精灯，各种有关培养基（见表16-3），50ml三角瓶，培养室。 用品 （二）诱导花药产生愈伤组织 2、主要作法： （1）花药的接种。 用肥皂洗净双手，再用75%酒精擦洗，然后用75%酒精擦拭花盘，在超净工作台取花蕾浸入饱和漂白粉上清液或0.1%升汞溶液中浸泡10-15分钟，再用无菌水冲洗2-3次。 用镊子将花药取出投入装有培养基的三角瓶中，每三角瓶接种30个左右花药。 接种后用棉花塞塞好，用记号笔写上接种材料、日期。 （二）诱导花药产生愈伤组织 2、主要作法（续）： （2）愈伤组织的诱导 诱导花药产生愈伤组织用的培养基一般采用Miller培养基+2，4-D 1mg/L+激动素1.5mg/L。 将接种到诱导培养基上的花药置于23-28℃的恒温室内进行暗培养。 接种后4-5天花药大部分变成浅棕色或深棕色，5-10天开始产生愈伤组织，陆续可延至二个月之久。 观察记载愈伤组织长出的部位和数量。 （三）　诱导愈伤组织进行器官分化与移栽 1、用品 MS培养基，6苄基嘌呤，激动素，吲哚乙酸，培养室，小花钵，无土培养物。 培养室 （三）　诱导愈伤组织进行器官分化与移栽 2、主要作法 （1）诱导愈作组织器官分化的培养基。 一般采用MS培养基补加2mg/L6苄基嘌呤和3mg/L激动素效果很好。试比较以下不同分化培养基对花药愈伤组织分化的影响，将结果填入表16-2。 培养基 表16-2 不同分化培养基对油菜花药愈伤组织分化的影响 　　　 （2）管理 　　 当愈伤组织长到2-3mm大小时，转移到诱导器官分化的培养基上，置于23-28℃恒温室内，每天光照9-11小时，光强2000Lx以上。 这样愈伤组织1-3周后可见绿，再过2-3周可见到从绿点抽出一丛或一片小叶。而在愈伤组织其它部分长出根的突起，随即叶片伸展。 有时根发生稍迟，在叶伸展时才出现根的突起或更迟，这时应转移到1/2MS培养基上，可长成完整幼苗。 由花药长成的愈伤组织，中间出现绿点 由愈伤组织长成的叶 由愈伤组织长成的叶簇 由愈伤组织长成的叶 经花药长成的小苗 经花药长成的小苗 （三）　诱导愈伤组织进行器官分化与移栽 （3）幼苗移栽 待分化好的幼苗3-4片叶时即可移栽。 移栽前先将根部的培养基冼净，然后栽入装有无土培养物的小花钵中，开始需用烧杯罩住幼苗，防止水分