同载基因和药物的超微载体粒子的制备及体外评价.pdfVIP

　第 4 期 高 　　分 　　子 　　通 　　报 ·69 · 同载基因和药物的超微载体粒子的制备及体外评价 胡云霞 , 原续波 , 康春生 , 郭 　毅 , 常 　津1 (天津大学材料科学与工程学院纳米生物技术研究所 ,天津 　300072) ( ) ( ) 　　摘要 : 以聚乳酸- 乙醇酸共聚物 PL GA 和自行制备的 O- 羧甲基壳聚糖 O- CMC 为原料 , 以5- 氟 ( ) ( ) 尿嘧啶 5Fu 为抗癌药物模型 , 以反义 EGFR 表皮生长因子受体 为基因药物模型 ,构建与评价了 同载抗癌药物与基因的复合功能纳米药物载体系统 。同载超微粒子的平均粒径为 2587nm ,粒径 ξ 分布指数为 0142 ,粒子表面 电位为 - 1067eV 。同载超微粒子在 PBS 中的释药行为研究表明:超 微粒子中5- FU 和基因均具有零级缓慢释放特性 。体外肿瘤细胞存活率实验和免疫组化实验均证 实同载超微粒子能高效抑制 TJ 905 人脑胶质瘤细胞的增殖 。最后用荧光共聚焦显微镜动态监测了 超微粒子进入瘤细胞的转染过程 ,发现粒子可在不同时间内进入细胞浆和细胞核 。 　　关键词 : O- 羧甲基壳聚糖 ; 聚乳酸- 乙醇酸共聚物 ; 超微粒子 ; 抗癌药物 ; 基因治疗 ; 缓释 引言 近年来 ,基因治疗恶性肿瘤的基础和实验研究已取得令人兴奋的效果 ,但 目的基因转染效率的 低下是影响基因治疗应用于临床的一个难题 。恶性肿瘤的治疗 目前以综合治疗为主 ,但其中传统 的化疗药物毒副作用大 ,临床应用受到一定限制 。所以,一方面寻找低毒高效的新药物对临床治疗 恶性肿瘤十分有意义 ;另一方面 ,联合应用两种或两种以上不同类药物可对癌细胞作用效应上有协 同作用 ,且能减少不良反应或延缓耐药性的出现 ,在某种程度上促进了化疗的应用 。 [ 1] Son 等 研究发现 ,化疗药物顺铂可以促进基因对癌细胞的转染效率 ,联合应用顺铂与 CD 自 杀基因还可以避免癌细胞对单一化疗药物的耐药性 。在此基础上 ,作者创新设计了一种同载抗癌 药物与基因的复合功能纳米载体系统 , 以实现抗癌药物与基因联合治疗的方案 。然后通过肿瘤细 胞的凋亡实验 ,免疫组化染色及 MTT 法考察复合功能纳米载体系统对肿瘤细胞增殖的影响 ,进而 优化实验方案设计和检验抗癌药物与基因治疗联合使用治疗脑胶质瘤的可能性 。 1 　结果与讨论 11 　同载基因和药物的超微载体粒子( 以下简称超微粒子) 的表征 同载基因和药物的超微粒子成球性较好 ,并且有较好的分散性 ,末出现粘连现象 。超微粒子的 平均粒径为 2587nm ,粒径分布较窄 ,分布指数为 0142 (见图2) 。从超微粒子的透射电镜照片可以 看出 ,粒子有明显的核- 壳结构 ,其表面有相对较为疏松的壳层 , 围绕在核心四周 ,这就是通过静电 络合在载药粒子表面的基因。而所采用的基因为链段较长的双链 DNA ,而图中粒子的基因壳层是 双链 DNA 带负电荷的磷酸基团与微粒表面正电荷的氨基基团结合发生电性中和 ,从而使 DNA 缩 ( ) ( ) 基金项 目: 国家重大基础研究 973 项 目前期研究专项基金 2001CCC01400 ; 天津市科委重点基金资助项 目 ( ) ( ) 013616611 ; 国家自然科学基金 ; 作者简介 :胡云霞 ,25 岁 ,女 ,硕士研究生 ,从事载药及基因纳米微粒的研究 ; 联系人 ,e-mail :jinchang @tj u . educn Tel :022,Fax :022-27890367