尾加压素Ⅱ在人类肺纤维化中的表达及意义.pdfVIP

尾加压素Ⅱ在人类肺纤维化中的表达及意义 1 2 2 2 2 1 王平凡 ，杨国嵘 ，薛永杰 ，贺雪娇 ，郁荣 ，朱任之 1 兰州大学医学院病理研究所，兰州（730000 ） 2 解放军第一医院病理科，兰州（730030 ） E-mail ：pingfan-wang@163.com 摘 要：目的 通过检测尾加压素Ⅱ（urotensin Ⅱ，U Ⅱ）在纤维化肺组织中的表达，探讨 其在肺纤维化发生发展中的意义。方法 用免疫组化法检测U Ⅱ、α- 平滑肌肌动蛋白（α- smooth muscle actin , α-SMA ）、纤维连接蛋白（fibronectin ，FN ）、Ⅲ型胶原在纤维化肺组 织中的表达，用原位杂交法检测U ⅡmRNA在纤维化肺组织中的分布。结果 与正常组织中 U Ⅱ极少量分布在成纤维细胞相比，纤维化肺组织中主要分布于成纤维细胞和平滑肌细胞。 与正常对照组（stage 0 ，S0 ）相比，轻度(stage 1 ，S1)、中度(stage 2 ，S2)和重度(stage 3 ， S3)纤维化组的U Ⅱ蛋白表达阳性率差异均有显著性（P=0.005 、P=0.007 、P=0.005 ）。肺纤 维化程度与U ⅡmRNA 、蛋白质的表达强度均呈正相关(P=0.000 、P=0.000)；U Ⅱ蛋白表达强 度与α-SMA、FN的表达强度呈正相关(P=0.000 、P=0.000)。结论 U Ⅱ参与了肺纤维化的发 生发展。 关键词：肺纤维化；U Ⅱ；免疫组化；原位杂交 中图分类号：R 1．引言 肺纤维化是由多种因素引起的，以肺间质成纤维细胞增生和细胞外基质蛋白，特别是胶 原蛋白和FN异常沉积为特征的病理过程。近年来，肺细胞因子网络学说在肺纤维化机制研 究中受到重视。 U Ⅱ是一种新近发现的血管活性肽和有丝分裂原，能促进心脏成纤维细胞增殖而参与心 肌纤维化[1] 。本实验通过免疫组化和原位杂交检测了U Ⅱ在正常肺组织及不同程度纤维化肺 组织中的表达，并结合对 α-SMA 和 FN 表达的检测，初步探讨了 U Ⅱ同肺纤维化发生发展 的相关性及U Ⅱ、α-SMA、FN 之间的相互作用，以期为肺纤维化发生机制的研究提供实验 依据。 2 ．材料与方法 2.1 标本来源 52例标本选自兰州大学病理研究所和兰州军区总医院2002-2007年收集的石蜡包埋组 织。经皮肺穿标本占57.69% (30/52)，经支气管镜肺活检标本占25.00% (13/52),手术切除标本 占17.31% (9/52)。男32例，女20例，男:女=1.6:1 。每例标本均连续切片5张， 4张用于免疫 组化、1张用于原位杂交。结合HE和Ⅲ型胶原免疫组化染色结果，对所有病例由经验丰富的 病理医师重新进行诊断并分组，其中S1，14例；S2，15例；S3，14例；S0，9例。 2.2 主要试剂 U Ⅱ、α-SMA、FN和Ⅲ型胶原抗体，免疫组化SABC试剂盒，U Ⅱ原位杂交试剂盒均购 自武汉博士德公司。 - 1 - 2. 3 方法 2.3.1 免疫组化 按SABC法常规步骤进行。U Ⅱ、α-SMA、FN和Ⅲ型胶原一抗浓度均为1：50 。用已知 阳性片作阳性对照，PBS代替一抗作阴性对照。 2.3.2 原位杂交 按试剂盒提供的步骤进行。切片脱蜡至水，3 ﹪H2O2 室温15 min，3 ﹪柠檬酸新鲜稀释 的胃蛋白酶37 oC消化13 min，预杂交39 oC 5 h，杂交（恒温箱39 oC过夜），杂交后洗涤，封 闭液39oC 30 min，生物素化鼠抗地高辛39 ℃ 1.5 h ，SABC室温3 h，生物素化过氧化物酶39 oC 30 min，DAB显色、封片、镜检。以阴性对照液代替探针作阴性对照。 2.4 结果判定