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O抗原的提取.doc
1 沙门氏菌脂多糖的提取（热酚水法）
热酚水法提取脂多糖所需的试剂
（1）45%酚水溶液：加55mL去离子水于45mL融化的苯酚溶液中，混匀后室温保存备用。
（2）95%酚水溶液：加5mL去离子水于95mL融化的苯酚溶液中，混匀后室温保存备用。
主要仪器
恒温水浴锅
微量高速台式离心机
台式恒温振荡器
LPS粗品的制备
1 菌体破碎
细菌收集物加蒸馏水进行悬浮
细菌悬浮液放入水浴锅中70℃水浴3min
菌悬液于碎冰中浴3min，反复冻融4次
LPS制备（热酚水法）
菌液加45％酚水作用5min,再加等量95％酚水，68℃水浴20～30min
冷却到10℃左右，5000 r/min离心45min
吸取上层水相，重复提取2次
所得溶液装入透析袋，透析48h,蒸馏水静置透析2d
加入聚乙二醇浓缩LPS溶液为原来体积的1/4，即得粗品LPS
LPS的纯化
粗品LPS中加入DNase I和RNase A，37℃下酶解4h
100℃水浴加热10min
冷却至室温后离心(1500r/min，30min)
取上清，加2倍体积的丙酮，过夜沉淀
200 r/min，2min，弃上清，即可获得纯化LPS。
阪崎肠杆菌中LPS的提取
实验仪器：
QL-901 漩涡混合器
SIGMA 4K 15离心机
10μL野生菌株接于20mL SOB培养基中，37℃过夜培养
转接到20mL摇瓶中，用于LPS的提取
5000rpm，4℃，10分钟，离心收集菌体，。
重悬菌体于Tris中，4℃，离心10min.
去上清，重悬于Tris pH8.1溶液，置于冰上，加入20μL溶菌酶30min
-70℃冰箱，30分钟浴化, 加入EDTA，震荡混匀，转移溶液至预冷离心管中
冰上，超声破碎细胞，4℃，6000rpm，15min，转移上清，16000rpm，60min，去上清，室温干燥
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