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产乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶基因工程菌的构建及遗传稳定性研究.pdf
38 2 工 业 微 生 物 Vol. 38 No. 2
2008 4 Industrial Microbiology Apr. 2008
陈 悦, 李 环, 韦 萍
(, 210009)
利用质粒pET 22b(+ ) 为表达载体, 成功构建了产N乙酰鸟氨酸 乙酰基酶基因工程
菌 L21pET22b( + )argE , 并考察了重组质粒的稳定性双酶切鉴定了质粒构建正确, SDS
PAGE 电泳证实了该菌可高效表达目的蛋白连续传代50次实验表明重组质粒具有结构稳定性
无选择压力连续传代时,质粒丢失严重; 有选择压力时连续传代未发生质粒丢失现象, 具有较好的
分离稳定性发酵过程中,用羧苄青霉素代替氨苄青霉素, 质粒稳定率由77.78% 提高到86. 42%
羧苄青霉素浓度为200gmL 时,质粒稳定率提高到98. 33%
: 乙酰鸟氨酸 乙酰基酶; 基因工程菌; 重组质粒; 遗传稳定性
[ 3] [4]
, ,
8 ,
argA H , ar gE N pET ,
(EC3.5. 1. 16) N L21(DE3) ,
[ 1]
1992 , Thierry Meinnel arg E ,
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argE , ,
,
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, ,
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, DNA ,
, ; ,
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L21pET22b( + )arg E
, , , ,
,
1
L , L
, D, L 1. 1
, pET22b(+ ) (Novagen ) ,
E . col i L21(DE3)
, 1. 2
, , (Oxoid, UK) ; IPTG(
: 973 ( 2003C 7160004)
: ( 1982~ ) , , , , :
E- mail: endospore@ 163. com
23
2 工 业 微 生 物 38
, ) 1. 7. 1 连续传代
ND, L ,
, 98% 1.0% L (+ ) (100 gmL ) , 37
, D, L 24 h50 ,
0.05 molL pH7.0
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