实验七 植物细胞骨架的观察.pptVIP

实验目的 实验原理 实验用品 实验方法 实验报告 下一次实验预告 实验目的 掌握考马斯亮蓝(coomassie brilliant blue) R250染色植物细胞内微丝的方法 通过对洋葱内皮细胞的处理，掌握植物细胞内微丝的显微形态 实验原理 细胞骨架(cytoskeleton)是指真核细胞中纵横交错的蛋白纤维网络结构，广义的细胞骨架包括细胞核骨架，细胞质骨架，细胞膜骨架和细胞外基质。狭义的细胞骨架是指细胞质骨架。 细胞质骨架按蛋白质纤维的直径大小、组成成分和组装结构的不同可分为微管（24nm）、微丝（7nm）和中间纤维(10nm) 。它们对细胞形态的维持、细胞的生长、运动、分裂、分化和物质运输等起重要作用。 考马斯亮蓝R250是一种普通的蛋白质染料，它可以使各种细胞骨架蛋白质着色，并非特异地显示微丝，但是由于有些细胞骨架纤维在该实验条件下不够稳定，例如微管；还有些类型的纤维太细，在光学显微镜下无法分辨，因此我们看到的主要是微丝组成的张力纤维。张力纤维形态长而直，常常与细胞的长轴平行并贯穿细胞全长。 染色时用的M-缓冲液，其中咪唑是缓冲剂，EGTA和EDTA螯合Ca2+离子，溶液中并提供Mg2+离子，在此低钙条件下，骨架纤维保持聚合状态并且较为舒张。 实验原理 植物细胞用适当浓度的TritonX—100处理后，可破坏和溶解质膜结构中及细胞内许多蛋白质，但细胞骨架系统的蛋白质却保