MRSA与鲍曼不动杆菌抗药基因检测及对3种醇类消毒剂抗性研究.pdfVIP

MRSA和鲍曼不动杆菌抗药基因检测及对3种醇类 消毒剂抗性研究 苏裕心 魏秋华 任 哲 武雪冰 张文福 军事医学科学院疾病预防控制所，北京100071 摘要 目的 观察耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和鲍曼不动杆菌对醇类的抗性与耐药基因携带情况。方 法 选择最小抑菌浓度试验、悬液定量杀菌试验和耐药基因PCR检测方法进行研究，并与标准菌株比较。 结果 2株MRSA对醇的MIC值高于6株鲍曼不动杆菌，稍高于标准菌株6538和8099。醇对2株MRSA的杀 灭对数值低于标准株6538和8099，对MRSA-1杀灭对数值大于MRSA-2，对6株鲍曼不动杆菌的杀灭对 数值大于标准株8099。PCR结果显示，鲍曼不动杆菌D162、3070122、3070341、3040217株qacE△1基 因阳性；鲍曼不动杆菌3040217和WJ0135株NDM1基因阳性。结论 2株MRSA对消毒剂的抗性高于标准 菌株，6株鲍曼不动杆菌对消毒剂的抗性低于标准菌株；杀灭效果以“乙醇+正丙醇”最强，“乙醇+异 丙醇”次之，单独乙醇最弱；4株菌携带耐消毒剂基因，2株携带NDMI基因。 1．3最小抑菌浓度(MIC)测定【7，81 采用营养肉汤稀释法，试验在20℃水浴条件下进行。用系列稀释法将各组消毒剂分别用蒸馏水稀 释成不同梯度浓度的受试液，取各组稀释度受试液2．5ml加入到含2．5mi双倍浓度营养肉汤中。然后加 入0．Iml含菌量约为108cfu／ml菌悬液，混匀，作为实验组样本；同时设阳性与阴性对照。将实验组、 阳性对照组及阴性对照组样本放置37(2培养24h，观察结果。实验组无菌生长的最低稀释度所对应的 受试液浓度为相应受试菌的MIC值，所有试验均重复3次。 1．4悬液定量杀灭试验 ml 用标准硬水将试验消毒剂配制成待测浓度的1．25倍，置于20℃水浴恒温。在无菌试管内加入0．5 菌悬液和0．5ml有机干扰物(30 g／L小牛血清白蛋白溶液)混合均匀，再加入4ml消毒剂，混合均匀， 作用至规定时问。取0．5ml样液加入到含4．5mi中和剂的试管中混匀，作用10min后，分别吸取Iml 样液接种无菌平皿，倾注融化的营养琼脂培养基混匀，凝固后置于37(2培养48h后进行活菌计数，计 算杀灭率。试验重复3次。 1．5耐药相关基因的检测 1．5．1 DNA模板制备用5lnl磷酸盐缓冲液(PBS)将各试验菌的18--一24h新鲜斜面培养物洗下，取 ml lml菌悬液置于1．5 Eppendorf管中，11000Xg离心2mill，弃上清。再加入200m无菌纯水重悬， 在沸水中煮10min后，立即在冰中冷却，11 min，取上清液2．5pI作为DNA模板进行 000×g离心2 PCR反应。 1．5．2 Delhimetallobcta-lactamase-I)fIlI121，根据GcnBank中的相关基因 抗生素超级耐药基因NDM．1(New 序列设计引物，交由上海生工合成。引物见表l。 表l耐消毒剂基因和抗生素超级耐药NDRl基因引物序列 GCAGA．AJ-GTGCAGAGTTCG361 Ⅺ6628 qac．矗JB qac刖B-F qacA／B．RCCAGTCCAATcArI戏TG 157氏驼96103 smr-F’ AAAC黼GCAACACCTACc极 qacC／snn smr-R AACGAAACl：ACGCCGACl：f^TG TAGCGAGGGCI_rI’ACl：丸AGC300 X15370 qacE6lqacEAl．F qacEAl-R卢江TCA