玻璃酸钠对实验兔膝关节软骨细胞DNA氧化性损伤影响研究.pdfVIP

玻璃酸钠对实验兔膝关节软骨细胞DNA氧化性损伤影响的研究 戴七一，刘靖，王大伟，兰靖杰，黄明棣 (广西中医学院附属瑞康医院，广西南宁530011) 摘要：为研究施沛特对膝关节骨性关节炎治疗的作用机制，采用新西兰兔进行动物造模而形成膝关节骨 性关节炎模型，随机将实验动物分为施沛特组和对照组并进行实验。8周后取动物右膝关节软骨进行DNA 提取，并采用LCMS2010型液．质联用仪检测标本中8．羟基脱氧鸟苷含量，其中施沛特组含量比对照组少。 提示施沛特治疗可能对减轻氧自由基对软骨细胞DNA的损伤有一定的作用。 关键词：施沛特；膝关节；氧化性损伤 氧自由基损伤可能是膝关节骨性关节炎发病的重要原因…。施沛特的实验研究证明其对清 除氧自由基有一定的作用f2J。而临床上施沛特用于膝关节骨性关节炎的治疗是否能减轻氧自由 基对软骨细胞DNA的损害，我们通过实验进行了初步的探讨。 1材料与方法 1．1实验动物及造模 巴比妥纳6ml，兔耳缘静脉注射麻醉，兔子仰卧位固定于手术台上，双下肢外展，右腹胶沟区 剪毛、消毒，于右腹股沟上缘1cm处作2em长纵切口，分别分离出右股静脉和大隐静脉，两 头双重结扎，于结扎中间处剪断，缝合伤口，敷无菌敷料。术后连用3天抗生素皮下注射。所 有动物单笼饲养。 1．2分组及实验 造模一周后。随机将10只新西兰兔分为施沛特组和对照组，每组5只。施沛特组于右膝 关节腔内注射透明质酸钠注射液(商品名：施沛特。山东博士伦福瑞达制药有限公司公司生 产)O．15ml／kg，每周1次，连用5周。对照组如何处理。两组动物在同样环境下进行饲养和活 动。 所有动物于第八周采用耳缘静脉注射空气处死，在无菌条件下切开右膝关节腔，使用咬骨 钳分别取下股骨内外髁及胫骨平台面软骨。 113DNA提取 分别取动物软骨用TE液冲洗后放入液氮中冷冻1小时，取出后用三层无菌纱布包裹，使 mM 用硬器把软骨研碎，放入研钵内，加入2 EDTA，10mMNaCl， m1消化液(10％Triscl8．0，1 1％SDS，2 mg／ml min， 液离心(12000r／min)5 r／min)10 min，收集上清液，加等体积苯酚充分混匀，再离一心(1200 收集上清液，加20 olRNase(10 M 清液，再以苯酚／氯仿各抽提1次，取上清液，再加1／10体积3NaAc，3倍体积低温无水酒 精，在一20。C过夜沉淀，离-I)(12000 r／min)10min，真空抽干后，溶于15001 TE液中。 1．4软骨标本处理 era×0．3cm×0．2 取胫骨平台内侧组织0．5 cm骨块，放入4％多聚甲醛中固定3天，用EDTA 脱钙4周，流水冲洗12小时，常规脱水，石蜡包埋，切片为5岬，常规HE染色。 1．5 8-羟基脱氧乌苷检测 mmX Hypersil—Keystone 150 HypurityCl8(2．1 ml／min，进样量5u1。质谱条件：大气压化学电离源 乙酸，pH4．O)：甲醇=85：15，流速为0．2 电压4．5 kV。 kV，喷雾气氮气(N2)的流速为2．5l／min，脱溶剂温度为250℃，检测器电压1．5 2结果 8．羟基脱氧乌苷检测结果：施沛特组均数为1．13¨g／rrd，而对照组则为3．