链球菌GapC蛋白的表达及其多克隆抗血清的制备.pdfVIP

第30卷 第 11期 中 国 预 防 兽 医 学 报 Vo1．30．No．11 2008 年 11月 ChineseJournalofPreventiveVeterinaryM edicine NOV． 2008 链球菌GapC蛋白的表达及其多克隆抗血清的制备 夏春雷，杨玉英 (黑龙江八一农垦大学 动物科技学院，黑龙江 大庆 163319) 摘 要：本研究对乳房链球菌GapC蛋 白基因进行了克隆、重组表达、蛋 白纯化和免疫原性试验。应用PCR 技术直接从临床分离的乳房链球菌菌株基因组中扩增出GapC蛋 白基因，并将其克隆至pET28a(+)上，转化大肠 杆菌BL21fDE3)中表达。经DNA序列测定分析，扩增出的基因与GenBank发表的乳房链球茵GapC基因序列 AF421900的同源性为 99．8％，氨基酸同源性为 100％；与GenBank发表的无乳链球菌GapC基因序列AF421899 的同源性为 91．4％；与停乳链球 菌 GapC基 因序 列 AF375662的同源性为 88．9％。表达 的融合蛋 白通过 MagneHisMT蛋 白纯化试剂盒纯化，纯化蛋 白免疫小鼠3次，制备GapC抗血清。本研究表达和纯化了乳房链球菌 GapC蛋 白，并制备出鼠抗血清，为下一步开展GapC重组蛋 白的应用研究莫定了基础。 关键词 ：乳房链球茵；GapC蛋 白；纯化 ；抗血清 中图分类号：$852．61l 文献标识码：A 文章编号：1008—0589(2008)11-0893—04 ExpressionofStreptococcusuberisGapC proteinandpreparation ofmouseantiseraagainstStreptococcusuberisGapC protein XIA Chun—lei，YANG Yu-ying (AnimalTechnologyCollege，HeilongjiangAugustFirstLandReclamationUniversity，Daqing163319，China) Abstract：GapC geneofStreptococcusubenswasamplifiedrfom clinicalisolatesbyPCR andclonedintoexpressionvector pET28a(+)．Sequenceanalysisshowedthatthegeneshared99．8％，91．4％and88．9％nucleotidehomologywiththepublished GapC sequencesofS~eptococcusubens．SgeptococcusdysgalactiaeandSgeptococcusagalactiae．Therecombinantplasmidwas transformedintoE．coliBL21fDE3)，andproteinexpressionwasinducedbyIPTGat37℃．TherecombinantGapCfusionprotein waspurifiedandsuccessufllyusedtoproduceantiserabyimmunizingtheKunmingmouse． Keywords：Streptococcusuberis；GapC protein；purification；antisera 链球菌病(Streptococcicosis)是由链球菌(Strepto． 链球菌能产生一种GapC蛋白，具有甘油醛 ．3． cocci)引起的人和动物多种疾病的总称，危害人畜健 磷酸脱氢酶(GAPDH)活性。GAPDH是原核及真核 康，流行范围广。畜牧业生产中链球菌引起的奶牛 生物糖酵解途径中的一种关键酶 ，可逆性地催化甘 乳腺炎(Mastitis)的损失最严重，包括产奶量降低、 油醛 ．3．磷酸转化成 1，3．二磷酸甘油酸，并能结合 牛奶品质较差、影响