苯并(a)芘(BaP)对人肝细胞L02的遗传与表观遗传毒性研究.pdfVIP

苯并 芘 对人肝细胞 的 S02-080 (a) (BaP) L02 遗传和表观遗传毒性研究 田美平，张洁，黄清育，刘良坡，彭思远，申河清* （中国科学院城市环境研究所城市环境与健康重点实验室 厦门 361021 ） 苯并(a)芘是多环芳烃（PAHs ）中致癌性最强、存在最广的一种污染物，其主要环境来 源是化石燃料和生物质的不完全燃烧。人体暴露后，经过细胞色素 P450 代谢酶的活化，产 生具有亲电性、活泼的代谢产物邻二醇环氧苯并(a)芘(BPDE)，与 DNA 的碱基共价结合，形 [1] 成稳定的 DNA 加合物，进而引起机体的毒性损伤 。目前的流行病学和体外实验研究都证 [2-3] 实了 BPDE- DNA 加合物与表观遗传修饰 DNA 甲基化存在相关性 。但是，机理尚不明确。 本研究采用 BaP 对 L02 细胞模型进行暴露实验，浓度范围设置为0-10μM ，分别以DMSO 和 DAC （5-杂氮脱氧胞嘧啶）作为阴性和阳性对照，暴露时间设置为 72hr 。利用荧光定量 PC 和重亚硫酸盐测序以及高分辨溶解曲线 PC 技术分析相关基因mRNA 表达和 DNA 甲 基化水平变化情况。结果显示：类似于 DAC 的作用，相对于阴性对照组，BaP 暴露导致 L02 细胞的总甲基化水平呈下降趋势，并显著诱导了催化 DNA 甲基化合成酶DNMT 、DNMT3a 和 DNMT3b 的mRNA 表达；DNA 错配修复基因 HMLH 、HMSH2和 HPMS2表达水平显著 升高；细胞周期调控基因 P16、P2 和 P53 的mRNA 水平显著被诱导；细胞色素 p450 酶家 族的 CYP1A基因启动子区甲基化状态约为 93.3%，DAC 处理后显著下降，在 BaP 处理时则 无明显变化；CYP1A在 10μM 高剂量 BaP 和 DAC 处理组中表达量分别显著上升到 163.5 和 6.0 倍。 通过细胞内的 CYP1A酶代谢作用，活化后的 BaP 与 DNA 结合生成 BaP-DNA 加合物。 结果显示，BaP 可能不是通过启动子甲基化修饰来调控 CYP1A基因表达；反之，大量 DNA 加合物的生成，可能抑制了 DNA 序列中 CpG 岛的胞嘧啶位点甲基化，导致基因组总甲基 化水平的降低。我们推断：由于总甲基化水平的降低，细胞以负反馈的形式诱导了系列 DNMT 酶基因表达的上调。同时，DNA 加合物的生成造成 DNA 复制过程的碱基错配，细胞通过 碱基错配修功能，诱导了修复基因的表达上调；另外，通过细胞周期调控基因参与，进一步 诱导过度受损细胞的凋亡。 因此，BaP 的毒性作用途径可能包括诱导碱基错配的遗传毒性和改变DNA 甲基化水平 的表观遗传毒性，其深入的机制值得进一步研究。 基金项目：国家自然科学基金（No.） 参考文献 [1]方建龙等.多环芳烃 DNA 加合物检测技术研究进展,环境与健康杂志,2012,29: 92-94. [2]Tretyakovaet al. Formation of benzo[a]pyrenediol epoxide-DNA adducts at specific guanines within K-ras and p53 gene sequences: stable isotope-labeling mass spectrometry approach.Biochemistry.2002, 41:9535-44. [3]Tekpliet al. DNA methylation of the CYP1A1 enhancer is associated with smoking-induced genetic alterations in human lung Int J Cancer. 2012，131(7):1509-16.