丹参成分抑制系统性硬皮病成纤维细胞增殖与胶原合成的研究.pdfVIP

[5]喻文球．中医皮肤病性病学．第1版．北京：中国医药科技出版社，2000． [6]张学军，何春涤，郑捷，等．·皮肤性病学[M]．第6版．北京：人民卫生出版社．2004．，107’ [7]朱文元．骆丹．谭城．等．荨麻疹[M]．南京：东南大学出版社，2001．48．， 95—96 · ． [9]斐建明，王高峰，王跃民，等．生理学[M]．西安：第四军医大学出版社，2004．237 [10]彭成．氢化可的松阳虚动物模型反思．中医杂志，1988，24(2)：56 [11]沈自尹．中医。肾的古今论．中医杂志L1997，(5)：48，． E—mai l：hsy77@126．com 丹参成分抑制系统性硬皮病成纤维细胞增殖及胶原合成的研究 上海中山医院皮肤科(200032) 李明’。吕小岩翁孟武 【摘要】目的研究丹参成分丹参酮IIA、丹参素、丹参多酚酸盐、原儿茶醛是否对系统性硬皮病成纤维细 盐、原儿茶醛对成纤维细胞增殖的影响， RT--PCR测定硬皮病组和对照组、以及各药物对硬皮病组成 硬皮病成纤维细胞的增殖具有抑制作用，作用时间和强度各不相同。它们对成纤维细胞I型和III型胶原 醛抑制系统性硬皮病成纤维细胞增殖，不同程度的抑制I、III型前胶原mRNA的表达，具有一定的抗纤 维化作用。 【关键词】硬皮病，系统性；成纤维细胞；丹参酮；丹参素：丹参多酚酸盐 。 系统性硬皮病(SSc)的主要特点是成纤维细胞合成以胶原为主的细胞外基质异常增多，导致皮肤、 消化道和肾脏等组织器官纤维硬化、功能障碍¨1。目前治疗SSc并没有很好的方法，4寻找有效的抗纤维 化药物一直是国内外学者研究的方向之一。本研究详细地研究了丹参的4种成分对于SSc成纤维细胞增殖 和I型：III型前胶原mRNA的表达的影响，并比较其作用的强度，为临床上寻找更为有效的抗纤维化药 物打下基础。 对象和方法 一对象． 学华西医院皮肤科(吕小岩)：复旦大学附属华山医院皮肤科(翁孟武)。 156 诊患者，3男2女(患者均签署知情同意书)。 二方法 儿茶醛由复旦人学药学院天然药化研究室提供。 2皮肤成纤维细胞的原代培养 SSc患者取臂部活动性硬化边缘的皮肤组织。对照组选取年龄、性别匹配的整形外科手术患者臂部 正常皮肤组织。按照文献【2】方法建立SSc组和对照组成纤维细胞原代培养细胞各5株，以含10％胎牛血 3四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)测定各药物对于SSc成纤维细胞增殖的影响． x 将SSc成纤维细胞以1 MTT溶液，加入溶解液200pl作用1 儿茶醛与无药物干预对照1为～组，丹参酮IIA与含0．2％DMSO无药物干预对照2为一组。 的影响。 x SSc纽及对照组成纤维细胞各5株，分别接种子3．5cm培养皿中(2105／皿1．)，培养至90％融合状 态。弃培养液，更换新鲜培养液培养24h后，提取RNA，以磷酸盐(PBS)缓冲液洗3遍加入 1mlTRIzol(美国INVITROGEN公司)，反复吹打15次，转移至1．5ml 中，加入0．5ml异丙醇，涡旋5秒，--20℃放置1 1 次，4C 培养皿后，培养至90％融合状态。?换新鲜培养液，分别加入上述4种丹参成分，作用24h后，提取 j RNA。 1 10mmol／L 65 pl dNTP混合液，无菌ddH20加至12pl4C反应5min后，加入4pl5X第一链缓冲液，2pl 0．1mol／L cDNA。 、 ． 将逆转录产物3pl t001)，2．5u 10mM 10xPCR Taq酶(上海生工公司