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应用无细胞系统表达恶性疟原虫环子孢子蛋白 1 2 2 2 1 韩静 ，杨英超 ，辛晓芳 ，王国治 ，叶嗣颖 （1. 华中科技大学同济医学院病原生物系，武汉，430000； 2.中国药品生物制品检定所，北京 100050） 孢子捕捉器/ 摘要 目的：应用麦胚无细胞蛋白表达系统，表达出恶性疟原虫环子孢子 蛋白（Circumsporozoite protein， CSP ）。方法：依据PlasmoDB 查得的恶 性疟原虫 Pf3D7 株 CSP 蛋白基因序列，设计一对引物，经 PCR 扩增出 C SP 蛋白基因全序列。用 NcoI 与 Sma I 双酶切后，与同样双酶切的 pIVE X 1.3WG 载体连接，转化大肠杆菌 DH5 а株，获得pIVEX WG 1.3-CSP 质粒。将 pIVEX WG 1.3-CSP 质粒加入到麦胚表达系统进行表达，表达 产物使用镍离子亲和层析柱纯化，获得重组 CSP 。结果：PCR 成功扩增 出CSP 基因序列，成功构建 pIVEX WG 1.3-CSP 质粒，经 WB 验证，该 重组质粒在麦胚表达系统中成功地表达了 CSP 。结论：使用麦胚系统表达 的CSP，可用于疟疾诊断试剂和疫苗评价方面的研究。 关键词：恶性疟原虫；环子孢子蛋白；麦胚无细胞表达系统；疟疾疫苗 Key words: Plasmodium falciparum ；Circumsporozoite protein ；Wheat G erm Cell-Free System ；Malaria vaccine 疟疾是一种严重危害人类健康的重要全球性虫媒传染病，根据世界卫 生组织2008 年全球疟疾报告报道,2008 年全世界有2. 43 亿临床病例,86. 3 万人死于疟疾 [1 ] 。非洲儿童每年平均罹患疟疾 1.6～5.4 次,儿童期死亡 者中,有五分之一是由疟疾造成的,每 30s 就有一名儿童因疟疾而死亡[2 ] 。 课题项目：国家传染病防控相关产品评价技术平台（2009ZX10608） 作者:韩静，E-mail：hanjing_54@sina.con 在我国，由于防控工作得力，疟疾年发病率已从 50 年代的 126.41/1 [3] 0 万降至 2000 年的 1.94/10 万 ；除海南和云南两省之外，其它各省已 基本消除恶性疟[4] 。2000 年之后，我国疟疾疫情又出现了回升的态势， 疟疾防控形式依然严峻。疟疾的治疗，现在一般是采取截断传染源和药物 治疗。随着疟原虫对抗疟药以及蚊媒对杀虫剂抗性的产生和扩散,特别是 多重抗药性的恶性疟不断的扩散[5 ] , 疟疾防治面临越来越大的困难，研 制有效的疟疾疫苗进行疟疾防治已受到越来越多研究者的重视,并已成为 研究热点。近年来疟疾疫苗的研制取得了较大的发展, 目前已有35 个候选 疫苗进入了临床试验[6 ]，其中葛兰素史克生物公司及Walter ReedArmyIn stitute of Research 共同研制的 RTS ,S/ AS02 在临床试验中取得了新的 进展，Ⅰ/ Ⅱ临床试验结果显示,该疫苗在人体中是安全的,并能产生强免 疫反应[2] 。疟疾疫苗主要分为抗红前期原虫疫苗、抗红内期原虫疫苗和传 播阻断疫苗。其中环子孢子蛋白(CSP)被认为是抗红前期原虫疫苗的一个 [7] 重要的抗