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用生物工程技术将外源基因转人葡萄的研究 黄学森 M．G，Mullins （中国农业科学院郑州果树研究所） （澳大利亚悉尼大学农学园艺系） 本文将生物工程技术应用于葡萄育种，摸索出一套基；、转移的工艺流程— 用经改造过的Ti质粒 作为载体，感染葡萄生长点碎片，获得基因转变体。 关键词：葡萄，根癌农杆菌，外源基因 根癌农杆菌(Agrobacteriuntumefaciens) ignon)，卡独娜 (Chardonnay)，格列那什 在感染双子叶植物伤口时，能将Ti质粒中的部 (Grenache),雷司令 R（iesling)。插条由澳1t} 分DNA片段整合到被感染值物的细胞核内。,e]0 利亚新南威尔土州农业部提供，为无病毒枝。将 经加工过的Ti质粒，能转移人们所需要的特定 插条扦插在装有地温线的箱子内，放置在 40C 基因。根癌农杆菌对葡萄是否感染，还没有人 的冷室中。一个月左右枝条开始生根，而上部 作过试验。本试验结果表明，它能感染葡萄。根 芽仍在休眠。将腐殖质、膨胀珍珠岩、沙子混 癌农杆菌中Ti质粒向番茄、烟草转移DNA片 合，用蒸气消毒，装入带孔的塑料袋。已生根的 段时，是感染这两种植物的原生质体(3,4,51，已获 插条移植到此容器内，置于温室，三个星期后获 得外来基因的原生质体再分化成植株。葡萄及 得新枝，以供试验用。 一些其他植物，至今还没有成功的原生质体培 用三种方法，使根癌农杆菌感染葡萄。 养技术。能越过原生质体培养而实现基因转 一（）用根癌农杆菌感染枝条茎段。 从温 移，是一个经济有效的方法。根癌农杆菌极易 室剪取枝条，在 10拓的次氯酸钠溶液中消毒 感染伤口，我们选择伤口面很大的生一长点碎片 15分钟，切成2-3cm的茎段。含q：质粒的根 与它共培，利用这些碎片具有强大分生能力的 癌农杆菌在 13g八 的肉汤营养液中培养 3-6 特点，获得基因转变了的植株。 小时。在无菌操作下，用针在枝条上造成伤口， 在伤口上涂上菌液，然后培养在MS固体培养 材料与方法 基上。2天后将这些枝条转移到液体MS培养基 试验在澳大利亚悉尼大学农学园艺系试验 中、其中合有 500,tcg/ml的青霉素。2天以后， 室进行 （1985一1987年）。试验所用载体为Ti 枝条培养在含 500u,g/ml青霉素的MS固体培 质粒C;，和 PGV3850:2103neo.C5，含有致 养基上。在第一步试验表明根癌农杆菌能感染 瘤基因，能使受体生长肿瘤。PGV3850::1103 葡萄的基础上，进行以下两个试验。 加。是经加工过的味，它已除去致瘤基因，插 二（）用生长点碎片与质粒为PGV3850:: 上了能抗卡那霉素的基因。含以上两种质粒的 1103neo的根癌农杆菌共培。Barless和Sken 根癌农杆菌，是由西德 J.Schell教授和比利 时M.Van.Montagu教授赠送的。 Huang\uesenetal.:ApplicationofBiotechno- logytoTransferthe.ForeignGenestoGrapevine 供试葡萄品种为赤霞珠 C（abernet-Sauv- 本文于 1987年 10月26日j次到。 已有培养生长点碎片的报道ti]［。本试验在此基 种处理相同。 础上，作了一定的修改。枝条从温室中采集，进 化学方法：基部膨大的分生细胞团，放在 行常规消毒。或直接从试管苗上采集。在”一 2务纤维素酶 (cellulase)-h0.5肠 离析酶 100倍解剖显微镜下，将顶芽外部叶片除去，留 (Macerozyme）的溶液中，5-8小时后用MS 下生长点及外围3-5个叶片原基，用刀切成 培养基冲洗3次，然后与含质粒CS：或 PGV 12-16个碎片。碎片放置在直径5cm的培养 3850::110