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细胞内DNA的显示 实验目的 实验原理 实验方法及步骤 作业 一、实验目的 学习DNA的Feulgen染色方法 了解DNA的Feulgen染色反应原理 观察DNA的Feulgen染色结果 DNA经稀盐酸(1mol/L)水解后，DNA分子中的嘌呤碱基和脱氧核糖间的键被打开，使脱氧核糖的一端形成游离的醛基。Schiff试剂中的无色品红与醛基反应形成含有醌基的化合物, 因醌基为发色团，故可呈现出紫红色。即DNA经稀酸水解后产生的醛基具有还原作用，可与无色品红结合形成紫红色化合物，从而显示出DNA的分布。 三 实验方法及步骤 ⑴ 牛蛙血涂片室温干燥 ↓ ↓ 正常反应片6片 对照片 1片 ↓ ↓ ↓ 90℃水浴中三氯醋酸20min，蒸馏水略洗 ↓ ↓ ⑵ 稀酸水解:冷 1mol/L盐酸（桌面）3 min ↓ 60℃水浴中1mol/L盐酸分别5、7、9、10、12、15 min（6个时间 梯度） ↓ 冷1mol/L盐酸中略洗（片子插入上下沾几下） ↓ ⑶ 染色: Schiff氏试剂 ↓暗盒避光30 min ↓ 亚硫酸水溶液I，II，III中脱色各45s ↓ ⑷ 水洗：流水冲洗 ↓ 蒸馏水 ↓略洗 镜检 四、实验报告中包含以下内容： 1. 绘图表示牛蛙血细胞中DNA的分布。 2. 讨论Feulgen反应的关键步骤的处理和实验结果的关系。 * * 设备： 全班需要四个装有5%三氯醋酸的染色缸，于边台90℃水浴锅内加热。 每小组一个小烧杯，五个染色缸，两个装1Mol/L的Hcl（一个装室温的Hcl，另外一个放在60℃的水浴锅内加热），其他三个装亚硫酸水I，II，III。 水浴锅每四人一台60℃，边台一台水浴锅90℃。 试剂： ①5%三氯醋酸，于讲课前置于90 ℃ 水浴锅预热；② 1Mol/L的Hcl，取比重1.18的浓Hcl82.5ml，加水至100ml ；③亚硫酸水溶液（漂白液），10%偏重亚硫酸钠水溶液5ml，蒸馏水100ml， 1Mol/L的Hcl 5ml，摇匀，塞紧瓶盖，此溶液应在使用前配制，否则会因so2逸出而失效；④Schiff试剂：将200ml蒸馏水煮沸，由火上取下，加入碱性品红1g，充分搅拌至溶解，待冷却至50 ℃ 时，过滤到磨口棕色瓶中，加入1Mol/L的Hcl 20ml，冷却到25 ℃时加入1g偏亚硫酸钾（K2S2O5）或偏亚硫酸钠（Na2S2O5）充分震荡后放于暗处过夜。次日取出，呈淡黄色或近于无色，加中性活性炭一匙，约0.5g，剧烈震荡1min，过滤后既得无色品红。 ⑤⑥ 蛙心血需要肝素钠，主要用于抗凝血，也可用其他抗凝剂代替。 RNA分布在细胞质和核仁内。但在染色质及染色体中也含有少量的RNA，核仁中也有少量的DNA。在线粒体，叶绿体等细胞器内除含有RNA外，也含有少量的DNA。 核酸是最重要的生物大分子之一，它和蛋白质一起构成生命的主要物质基础。核酸的最主要的生物学功能是它直接参与生物遗传信息的传递过程.在真核细胞中DNA主要分布在细胞核中,并与蛋白质结合形成核蛋白,构成染色质(体)的主要成分.在线粒体和叶绿体中也有少量DNA存在。 Feulgen反应：自从1924年Feulgen等人建立了DNA-Feulgen染色方法以来,至今这种方法仍是DNA定量测定的主要染色方法之一。Feulgen染色是经典显示去氧核糖核酸的方法 。 具体反应原理是，标本经稀盐酸水解后，DNA分子中的嘌呤碱基被解离，从而在核糖的一端出现了醛基。Schiff试剂中的无色品红可与醛基反应，形成含有醌基的化合物分子, 因醌基为发色团，故可呈现出紫红色。也就是说, DNA经稀酸水解后产生的醛基，具有还原作用，可与无色品红结合形成紫红色化合物，从而显示出DNA的分布。 Feulgen反应的结果及应注意的问题 一、Feulgen反应的结果：由于DNA主要分布在细胞核，所以经Schiff