腺病毒滴度不同测定方法比较.pdfVIP

·234 · 南方医科大学学报（JSouthMedUniv） 2011;31(2) ·技术方法· 腺病毒滴度不同测定方法比较 1 2 1 1 1 2 2 1 2 孙鹏宇 ，张艳玲 ，荆玉明 ，张信基 ，张哲欢 ，黎诚耀 ，陈白虹 ，谭万龙 ，李红卫 1 2 南方医科大学 南方医院泌尿外科，生物技术学院，广东 广州 510515 摘要：目的将目前测定腺病毒滴度常用的OD260 法、荧光定量PCR 法、绿色荧光蛋白标记法、壳蛋白免疫法、细胞病变 （CPE）法进行比较研究，分析和讨论各种方法的优缺点。方法4 种重组腺病毒（Ad-G-AT2R-EGFP、Ad –CMV-EGFP、 Ad-mif-shRNA-EGFP 和Ad-CBA-GFP）扩增、纯化后，同时分别用OD260 值法、荧光定量PCR 法、绿色荧光蛋白标记法、壳 蛋白免疫法及CPE 法测定病毒滴度，并以壳蛋白免疫法测定结果作为标准，对各种方法所得结果进行比较研究。结果绿 色荧光蛋白标记法、CPE 法与壳蛋白免疫法同时测定4 种腺病毒滴度，其结果无统计学差异（P0.1）。荧光定量PCR 法测 定值明显高于壳蛋白免疫法（P0.05），但与该法测定结果间存在良好的相关性（r=0.965），约为壳蛋白免疫法所测得结果 的10倍。OD260 法测得结果与壳蛋白免疫法测得结果间则无相关性。结论绿色荧光蛋白标记法与壳蛋白免疫法是测定 腺病毒感染性滴度最为快速有效的方法，其结果客观可靠，能真实地反映病毒的实际感染力。荧光定量PCR 法测定结果 反映的是完整的病毒颗粒数，能够间接反映病毒的感染力，且该方法操作简单，耗时短，同样有较高的实用性。 关键词：腺病毒；病毒滴度测定；壳蛋白免疫法；绿色荧光蛋白；荧光定量PCR ；细胞病变法 中图分类号：R373.9 文献标志码：A 文章编号：1673-4254（2011）02-0234-05 A comparative analysis of the methods for tittering adenoviruses 1 2 1 1 1 2 2 SUN Peng-Yu , ZHANG Yan-ling , JING Yu-ming , ZHANG Xin-ji , ZHANG Zhe-huan , LI Cheng-yao , CHEN Bai-hong , TAN 1 2 Wan-long , LI Hong-wei 1 2 Department of Urology, Nanfang Hospital , Biotechnology Institute , Southern Medical University, Guangzhou 510515, China Abstract: Objective To compare different methods commonly used for tittering adenovirus and analyze the advantages and limi