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荧光PCR原理与应用 荧光ＰＣＲ原理 荧光信号的种类 荧光染料直接结合扩增产物 荧光标记引物 特异性荧光探针 荧光信号的产生 Fluorescence resonance energy transfer ( FRET ) 荧光标记基团在激发光刺激下生成某波长的发射光，当另一屏蔽基团与其距离合适时，原发射光将会被屏蔽基团所吸收，并转化为其他波长的发射光或热能，称之为FRET。 荧光信号的淬灭-FRET原理 Taqman探针 Taqman探针技术 结果分析的两重要参数 荧光阈值（threshold ）：荧光本底设定PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号，荧光阈值的默认设置是3-15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍。 Ct值：C代表Cycle，t代表threshold，Ct值的含义是：每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数。 Threshold and Ct 定量原理和方法 原理：每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析.。 外标法：将几个已知拷贝数的纯化的目的基因标准品进行FQ-PCR 扩增，绘制荧光定量标准曲线。 内标法：将已知浓度的内标基因加到各标本中，与标本一起经历核酸提取、加样、逆转录、PCR扩增及信号检测的全过程，比较内标最后的实测值与已知值，以检验