荧光微菌落快速检测的基本步骤.docVIP

荧光微菌落快速检测的基本步骤 材料和方法 主要材料 ***MRS培养基（英国OXOID公司）或NBB-A培养基 ***CFDA（羧基荧光素二醋酸酯，德国SIGMA公司） 25mg包装CFDA说明： 6-羧基二乙酸光素(6-cfda)??sigma?货号：c5041? 说明：可用于从凋亡细胞中区分出有活性的细胞 分子式：C25H16O9；分子量：460.39 CAS#：3348-03-6 特性：纯度：95%（HPLC） 溶解性：溶于DMSO或丙酮 储存条件：-20℃ 注意：荧光素在不同的条件下会发生淬灭，因此建议买25mg包装即可，使用时先配成1000PPM母液，分装每管100μL，使用时取用1管。 仪器和设备 厌氧罐（英国OXOID公司），厌氧产气袋（英国OXOID公司），厌氧指示片（英国OXOID公司），荧光显微镜（奥林巴斯BX41），pH计，生化培养箱，抽滤系统（美国pall公司），醋酸纤维膜（孔径0.45μm，直径47mm，德国沙多利斯公司）和聚碳酸酯膜（孔径0.45μm，直径47mm，美国millspore公司）。 醋酸纤维膜（孔径0.45μm，直径47mm，德国沙多利斯公司或pall公司）： 聚碳酸酯膜（孔径0.45μm，直径47mm，美国millspore公司）： 1.3主要试剂的配制 ***PBS缓冲液： 称取Na2HPO4﹒12H2O 2.902g、NaH2PO4