siRNA导入细胞的策略.docVIP

siRNA导入细胞的策略 siRNA导入哺乳动物细胞的策略 RNAi在哺乳动物细胞中通常用于阻断特定基因的表达从而研究基因的功能成功的进行RNAi的问题在于使siRNA导入细胞常见的做法是将靶向特定基因的大约碱基长短的双链，或者是—50-mer的发夹结构（）转染到细胞。通过质粒表达同样可以抑制特定基因的表达。—50-mer的发夹结构（）转染到细胞。在细胞内会自动被加工成为，从而引发基因沉默或者表达抑制。?????胞内表达siRNA，尽管细节各有不同，但载体大都是用聚合酶（）启动子启动编码的序列。选用启动子的原因在于这个启动子总是在离启动子一个固定距离的位置开始转录合成，遇到—5个连续的即终止，非常精确。当这种带有启动子和编码序列的质粒转染哺乳动物细胞时，这种能表达的质粒确实能够下调特定基因的表达，抑制范围包括外源基因和内源基因。采用这种方法的优点在于，通过表达质粒的选择标记，载体能够更长时间地抑制目的基因表达。当然还有一点，那就是由于质粒可以复制扩增，相比起化学合成来说，这就能够显著降低制备的成本。 ????? pSilencer? siRNA 表达载体系列是用于在培养的哺乳动物细胞中表达的一系列载体。在载体上包含有启动子，氨苄抗性基因和大肠杆菌复制子，只要将编码一小段对应目的基因特异序列的、其能形成发夹结构的序列插入载体中启动子的下游，转入哺乳动物细胞，载体就能表达出发夹结构的，