人血清中总胆固醇的测定.pptVIP

人血清中总胆固醇的测定 [实验目的及要求] 学会利用氧化酶法测定血清中总胆固醇含量的原理和方法。 [实验原理] 胆固醇脂+H2O 胆固醇+游离脂肪酸 胆固醇+O2 ⊿4-胆甾烯酮+H2O2 2H2O2+4-AA+4-氯仿 醌亚胺（红色）+4H2O CEH：胆固醇脂酶 POD：过氧化物酶 CHOD：胆固醇氧化酶 4-AA：4-氨基安替吡啉 醌亚胺在500nm有特征吸收，且生成量与样本中的胆固醇含量成正比，可通过测定标准品反应生成的醌亚胺的吸光度值，计算出样本中胆固醇的浓度。 [实验仪器及试剂] 试管 移液管 UNICO-2000型分光光度计 恒温水浴锅 标准血清 样本血清 蒸馏水 酶试剂盒 [实验步骤] 按下表加入各反应物： 各管混匀，37℃反应6 min，以空白管校零。 * * A500nm 20 —— —— 样本血清 —— 20 —— 标准血清 —— 20 蒸馏水 2000 2000 2000 酶试剂 样本管 标准管 空白管 微升 A样本 A标准 ×标准血清浓度 胆固醇含量= *