细胞内因子的流式检测.pptVIP

基本概念 细胞内细胞因子染色是用抗细胞因子抗体与细胞表面或胞内特定亚群标志组合，即可检测不同细胞亚群细胞因子的分泌。 Th1细胞分泌IFN-g、IL-2、TNF-a Th2细胞分泌IL-4;IL-5;IL-10 技术优势 快速：流式定量检测细胞内细胞因子可在一天内完成，实验流程需6-8小时，实际操作时间为1-2小时，快速简便 简便：无需组织培养，可以全血分析，无需分离PBMC 灵敏度高：高度灵敏的荧光标记与检测系统 高效：可以在同一个细胞内同时检测两种或更多种细胞因子，也可根据细胞免疫表型区分分泌细胞因子的细胞的亚型，进行多参数相关分析 安全：减少样本处理与生物源性污染 接近生物体的分析条件：全血检测保留细胞及生化微环境更准确反映了体内状况 所需试剂 1、细胞表面染色用的荧光标记的单抗试剂 如CD3、CD4、CD8、CD25等 2、荧光标记的细胞因子抗体： 如IFN-g、TNF-a、IL-2、IL-4等 3、溶血素：裂解红细胞 4、激活剂： 如PMA、Ionomycin，可以刺激T细胞活化并分泌细胞因子 所需试剂 5、阻断剂 阻断高尔基体介导的转运作用，使得刺激细胞表达的细胞因子聚集在胞浆内质网内，以利于准确检测细胞产生细胞因子的能力。 Monensin Bre