质粒DNA的小量制备.docVIP

质粒DNA的制备 实验原理： 质粒DNA为细胞核外小的环状双链DNA，在强碱作用下，核DNA与质粒DNA都会变形生成单链，当加入乙酸或乙酸钾时，在中性PH条件下只有质粒DNA会变性，而核酸DNA依然保持单链状态，再通过一系列抽提、离心即可得到纯化的DNA。 实验仪器与药品： 移液枪、离心机、EP管、水浴锅、电泳槽、枪头（10μl、200μl、300μl） 葡萄糖、Tris-Hcl（PH8.0）、EDTA（PH8.0）、NaOH、SDS、乙酸钾、醋酸、胰蛋白胨、酵母浸出物、NaCl 10×Buffer、dNTP、TaqE、Primer1、Primer2、Mg2+-Buffer、双蒸水、ECORI 实验步骤： 分别配置培养基、溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ备用，其成分如下： 培养基：胰蛋白胨10g、酵母浸出物5g、NaCl10g 溶液Ⅰ：葡萄糖50mmol/L、Tris-Hcl（PH8.0）10 mmol/L、EDTA1 mmol/L 溶液Ⅱ（新鲜配置）：NaOH0.2mol/L、SDS1% 溶液Ⅲ：KAC29.4g、冰醋酸11.5ml、双蒸水28.5ml 将配制好的溶液与包装好的枪头盒一起放入高压灭菌锅中灭菌。 接种菌培养 取1.5ml培养物于EP管中，1300rpm离心1min集菌，去上清；再加入100μl预冷的溶液Ⅰ，振荡器剧烈振荡，使菌体悬浮，此时可看到EP管中变浑浊。 加入200μl