质粒提取中常见的问题.docVIP

质粒DNA提取常见问题分析 1.加入solution.III，经10分钟离心后细菌沉淀怎么不结实，有的漂浮在液面，有的贴在离心管壁上，一摇晃即破碎脱落下来？ DNA 的缠绕，沉淀就显得不结实。解决方法：将细菌的用量增加。 2.加入soln.III，经10分钟离心后细菌沉淀怎么不结实，呈大块的水泡状，上清较少？ 1）使用了过多的细菌，导致菌体未被有效裂解。解决方法：将细菌用量减半。 2）细菌悬浮不充分,存留小菌块, 导致菌体未被有效裂解。解决方法：注意将细菌悬浮充分。 3）加Solution III后中和不充分。解决方法：如果细菌用量较多，请注意多翻转几次直至中和后的沉淀呈松散的豆腐花状(也可以稍用力混合直至沉淀呈松散的豆腐花状)。 4）Solution II出现沉淀。解决方法：如果实验室内温度低于15℃，使用试剂盒前请注意观察Solution II中是否出现沉淀。如果出现沉淀，请于37℃水浴溶解沉淀后再使用。 5）Solution II 长时间暴露于空气中被CO2中和，导致菌体未能被有效裂解。解决方法：可用经典碱裂解法抽提质粒DNA方法中的II液替代 Solution II使用。 3.出现严重的RNA污染？ 1）未在Solution I中事先加入RNase A1。解决方法：补加RNase A1。 2）加入RNase A1的Solution I长期保存于室温，导致RNase A