高通量的转录因子活性检测.docVIP

高通量的转录因子活性检测 摘要： 一种特定的细胞信号通道通常可同时激活多种转录因子，一个特定基因的表达在多种转录因子的控制之下，因此同时检测多种转录因子的活性对理解细胞调控的分子机制至关重要。这时，EMSA就无能为力了。为此，美国Signosis 公司推出了TF活性检测微孔板阵列试剂，可同时检测多种转录因子的活性。该试剂包括I和II，分别可检测48种和96种不同的转录因子，包括NFkB、AP1、HIF1和p53等。 转录因子（transcription factor，TF）在真核生物的基因表达过程中发挥着重要作用，或调节基因表达的强度，或控制目的基因的时空特异性表达，或应答外界刺激和环境胁迫。近年来，随着干细胞研究的不断升温，人们对转录因子的兴趣也日益浓厚。同一个基因组，为何最终分化成不同的表型，这正是转录因子让人着迷的地方。生物通 过去，对于转录因子的活性检测，人们常常采用电泳迁移率改变分析（EMSA）。这是一种经典技术，过去通常采用32P放射性同位素标记的DNA显现实验结果，需要数天。当然，现在也采用化学发光检测来取代同位素。不过，EMSA 操作相当繁琐，整个过程包括了核蛋白的抽提、定量，探针的标记与纯化，探针与蛋白质的结合，电泳与显影等若干步，且每次只能检测一个转录因子。 然而，一种特定的细胞信号通道通常可同时激活多种转录因子，一个特定基因的表达在多种转录因子的控制之下