天然药物防龋物质基础研究—五倍子防龋有效成分化学研究.pdfVIP

墨△放堕脚盔堡蕉壁黉茔垄金垫 垒塞撼差蒌璺 垫鲢主!旦 盛盎 型：矗、B型uncA在不闻龋敏感组交链菌株的分布不同，矗基因型在高龋组的检出高于无 龋组，C、D型uncA在不同耐酸力菌株的分布不同，高耐酸性菌株中c型基因uncA的检出 高于低耐酸力菌株；C、D型uncA的越RNA表达水平不同，且在不同的耐酸株表达也不同， c型基因表达高。提示uncA基因多态性与菌株的耐酸力和致龋性相关，其基因转录上调 可能影响F-ATPase的酸调节能力。 耐酸力蓊株的分布不同，A型高耐酸株的比例较低耐酸株高，但其mRNA表达水平与B基因 型没有显著性差异。引起基因分型的碱基变异区域编码的氨基酸残基不在13亚基的催化 位点区域，提示突变不引起催化功能氨基酸的改变，可能参与结合氨基酸的调控；不网 的耐酸株uncD的mRNA表达水平明显不同，高耐酸的菌株有13亚基基因昭上调。 表达水平上均具有明显的遗传多态性，且基因的遗传多态性与萤株的产酸和耐酸能力密 l 切相关，变链菌可能通过LDH和F-ATPase基因的变异及转录水平的调节上调产酸和耐酸 力以适应低pH环境，进而增强菌株的致龋性。为提高耐酸力，菌细胞所作出的F—ATPase 适应性调节中，y甄基和C、a甄基基因相对保守，面b、a和13亚基则活跃上调，表现 核苷酸序列和转录水平上的适应性改变。 天然药物防龋的物质基础研究一五倍子防龋有效成分的化学研究 谢倩周学东 驾川大学华西口腔医学院口腔内科 龋病是在以细菌为主的多种因素影响下，牙体硬组织发生的进行性破坏的一种疾 病。龋病麓预防一蛊是国内外的研究重点。现有的龋病预防措施都存在一些不足。我因 天然药物资源丰富，历史悠久，有着巨大的开发潜力。本课题组在国内外首次开展中药 防龋的系列研究，前期研究通过对多味中药的抗龋筛选实验发现五倍子(Galla Chinesis)具有与化学制剂洗必泰、氟纯钠相近的抗龋效能。在不影响备实验菌株生长 的较低浓度下也可有效抑制细菌产酸，产胞外多糖及早期对羟磷灰石的黏附等致龋毒力 因子，具有抑制致龋菌生长、调节细菌代谢的作用。在体外生物膜模型中，五倍子水提 物具有抑制缨菌对羟磷灰石表面的黏附及牙体硬组织脱矿翁作用，著与氟纭钠的作用相 当。但是对于五倍予防龋的活性成分及其防龋机制还缺乏进一步的认识，因此，本研究 拟通过化学方法，结合体外系列筛选实验和El腔生物膜模型，对天然药物五倍子防龋有 蔫3 蕴垒盗望垄蕉黧蕉匿雯茎查金邈 迨塞蕉圭垂彗 兰壁箜圭!基 煎塑 效部位(活性成分)进行分离追踪，综合评估其防龋效能；筛选出防龋有效成分，并对 其进行结构鉴定。为进一步研究五倍子防龋有效成分的作用机制提供实验基础。方法： 在前期研究的基础上，利用溶剂提取法提取五倍子生药中的多酚类物质，(前期研究证 LH．20 实此类提取物具有抗龋活性)。并对五倍子多酚性化合物以葡聚糖凝胶sephadex (Amersham Biosiences安玛西亚上海公司)为分离材料进一步分离，依次数去离子永 倍子提取物。结合体外防龋筛选实验，测试样品对口腔细菌生长、产酸、产糖、黏附的 作用及其对釉质脱矿影响，以此对五倍予提取物中的有效成分进行筛选追踪，利瘸红外 光谱，核磁共振，高效液相色谱等技术鉴定筛选得到活性成分的化学组成及结构；在人 正口腔生物膜模型中定植4种口腔常驻壤(变形链球蔼，血链球菌，乳杆菌，内氏放线 蘸)于发酵罐中，在稳定蠡留培养条件下进行连续培养，待缨菌构成比达到稳定盾，将缨 菌泵入恒流培养室，在羟磷灰石片、玻片及牙釉质块上，形成人工蒲斑生物膜；通过对 模型恒流培养室中定时给予含药物化学组分的蔗糖溶液(以同浓度的蔗糖溶液与含 228ppm氟化钠的蔗糖溶液分别作为雕性与阳性对照)，观察实验筛选出的活性成分对 实验生物膜表面形态，细菌构成，细胞外水不溶性多糖的形成及釉质结构的影响，并连 续观察培养系统中的pH动态变化。以此对所筛选的五倍子活性成分的抑龋效能进行进 一步评估，观察其对实验生物膜的影响。 结栗：重．经分离得到五倍子多酚性化合物和 五倍子A、B