ELISA法检测配合饲料呕吐毒素前处理方法的研究.pdfVIP

饲料检测 ELISA法检测配合饲料 呕吐毒素前处理方法的研究 李俊霞周浩杨红叶梅万渝平 成都市产品质量监督检验院食品中心 摘要对配合饲料中用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测呕吐毒素的前处理方法进行研究，通过试 验确定最佳提取方法：60％乙腈水溶液振摇80min、提取、过滤及氯仿净化。该方法平均回收率为85．3％ 差，可为配合饲料中呕吐毒素的准确定量检测提供有效手段。 关键词 呕吐毒素 酶联免疫法 配合饲料提取方法 中图分类号：S816．17 文献标志码：B 呕吐毒素，又名脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)，养箱(日本三洋MIR一253)。 属单端孢霉烯族化合物，是镰刀菌霉菌在低温潮湿 1．1．3样品来源 的原料运输及储存过程中产生的次生代谢产物，主 试验所用配合饲料及谷物样品均从成都地区饲 要污染谷类作物和粮食制品。DON可降低饲料价值， 料生产厂(公司)购买，共计18组。 牲畜采食后会导致免疫机能下降，繁殖能力降低。 1．2试验方法 人食用含有呕吐毒素的畜肉会导致呕吐、腹痛、眩 1．2．1毒素的提取 晕及四肢发软等症状。DON易溶于水及有机溶剂 准确称取5．00g粉碎均匀的配合饲料样品于各 (甲醇、乙醇、乙腈、丙酮、乙酸乙酯和氯仿等)。 具塞三角瓶中，加入25mL已配置完成的提取液， 目前检测DON的方法主要有2种，色谱法和酶联免加塞水封过滤。 5009．11l 疫吸附试验(ELISA)法(国标方法GB／T 1．2．2净化 一2003第二法)；而国标方法的检测范围适用于谷物 准确移取5mL滤液于125mL分液漏斗中，加 及其制品(食品)，对配合饲料中DON的检测尚无 入10 mL氯仿，加塞，轻微振摇混匀后，静置分层 标准方法。目前，市场上的配合饲料成分复杂，添 (如果分层不明显，可滴加40％的NaCI溶液，再 加的营养强化剂和重金属离子对酶易产生抑制作用， 次振摇30 S，可清晰分层)，放出的下层液体经预 导致ELISA法检测过程中出现误差，影响饲料检测 先用氯仿浸润的硫酸钠过滤小柱过滤，重复萃取4 结果的正确性；因此文章对ELISA法检测配合饲料 次，最后用1mL氯仿冲洗小柱，合并滤液，在通 中DON的前处理方法进行研究。 风橱内水浴氮吹干后，准确加入5roLl0％甲醇水 1材料与方法 溶液溶解混匀。 1．1材料 1．2．3样品提取液的检测 1．1．1主要试剂 从冰箱中取出DON的ELISA定量试剂盒，平 甲醇、乙腈、氯仿和无水硫酸钠(以上试剂均 衡至室温；按试剂盒要求准备好洗涤液；按步骤测 为化学分析纯)，纯水，DONELISA试剂盒。 定提取液。 1．1．2设备 2结果与分析 酶标仪(奥地利Sunrise—basic)；恒温生化培 2．1提取条件的优化 收稿H期：2012—12—31 分别用不同体积分数(10％～90％)的甲醇 第一作者：李俊霞，E—mail：jnuxiali@163．com