6 平板色谱法.pptVIP

1938年薄层色谱最早由Izmailov和Shraiber建立。称为“点 滴色谱”。 1944年Martin等建立纸色谱法。 1958年Stanl设计了涂布器，该技术得到迅速发展。 目前，薄层色谱仍然是一种非常简便有效的方法。如有机合成中俗称的“点板/爬板” 一、纸色谱法的分离机理 以 滤纸作为载体，将欲分离的试样溶液用毛细管滴在滤纸的原点位置上，利用滤纸吸湿的水分（通常纸上都吸有其本身质量20%的水分）作为载体（固定相），另用一种有机溶剂作展开剂（流动相）。由于毛细作用，有机溶剂在纸上不断上升。上升过程中，样品在流动相（有机溶剂）和固定相（纸上的水）之间分配，相当于在水/有机溶剂之间的萃取平衡，由于分配比的不同，样品中的不同溶质得以分离。一定时间后，取出滤纸，喷上显色剂，可看到不同的有色斑点。 二、比移值（Rf）及其影响因素 比移值Rf: x: 斑点中心到原点的距离 y: 溶剂前沿到原点的距离 Rf 介于0~1之间。 Rf 的大小取决于溶质在二相间的分配系数及 滤纸的性质. 不同的组分具有不同的分配系数, 因 而也就有不同的Rf. 这就是定性的依据. (4)温度应基本相同，层析罐/槽应密闭好，防止有机溶剂的挥发导致有机相组成的改变。温度会影响溶质的分配系数及流动相的扩散速度。层析操作应在恒温下进行。 (5)展开方式不同, Rf也不同：下行法的Rf最大，环行法其次， 上行法较小。 三、操作技术 1、滤纸的选择与准备 a. 要求滤纸质地均匀、平整无折痕边缘整齐；　 b. 要求滤纸的纤维松紧适宜； c. 滤纸的杂质含量少。 预处理：以0.1 - 0.4 mol/L HCl (或 2 mol/L HAc)浸泡数小时, 除去无机杂质后, 取出用蒸馏水洗净, 再将滤纸放在丙酮-乙醇( 1 : 1 )中浸泡 一周时间, 除去有机杂质,再取出风干备用. 2、点样 先用铅笔在距纸条一端2 ~ 3 cm处划一条直线（起始线）并在线上隔一定距离划一“x”号表示点样位置；用微量注射器、毛细滴管（Φ＝0.5mm) 等做点样工具吸取试液轻轻与“x”号接触，使点样的斑点直径为0.2 ~ 0.5 cm, 每次点样2 ~ 20 μl于滤纸上，以冷风吹干； 干后，将纸的两边用线缝好，以圆筒形式置于层析缸中展开。 3、展开 展开剂的选择：a.欲分离物在两相中的溶解度；b.展开剂的极性; c.展开剂与欲分离物间应无化学反应; d.欲分离物在展开剂中的分配系数最好不受温度的影响; e.欲分离物在两相间瞬间达到的分配平衡. 常用的展开剂有：水饱和的正丁醇、正戊醇、酚、四氯化碳、氯仿 、苯、丁酮、丙酮、有机酸、有机碱，有时也加入一定比例的无机酸、无机碱、甲醇、乙醇等. 。 展开前，层析缸与已点样滤纸必须予先经水蒸汽、溶剂蒸气饱和。 方法是：将溶剂和水置于分液漏斗中充分振荡，分层后，将水层放入小烧杯内，置于层析缸中平衡一段时间，使滤纸吸饱蒸汽，然后移去小烧杯，将溶剂倒入溶剂槽中，立即将点好样的滤纸的一端浸入溶剂槽内展层 4、显色 展开后，将滤纸从层析缸中取出，用铅笔在溶剂前沿作记号。有色物：直接观察各个色斑。无色物则采用显色法观察。 (A)物理法显色； 用紫外灯照，观察有无吸收或发出各种不同颜色的荧光斑点，并用铅笔画下斑点的位置及大小。 (B)化学法显色 利用各种物质的特性反应，喷洒适当的显色剂，若被分离的物质含有羧酸，可喷酸碱指示剂溴甲酚绿，当斑点呈黄色，说明羧酸确实存在；若被分离的物质含有氨基酸，则可喷茚三酮，多数氨基酸呈紫色，个别氨基酸呈黄色。其它化合物所用显色剂可从手册里查阅。 四、定性、定量分析： 定性：测量相同条件下的比移值，并且与内标物比较。 定量：测量斑点大小、颜色扫描等；将斑点剪下后利用 化学反应测量，如灼烧称量；溶解后滴定、比色等。 剪洗法：将斑点剪下，用适当的溶剂洗脱，然后用各种仪 器方法（如红外、紫外、原子吸收、发射光谱）， 也可将斑点剪下灰化，再用适当的溶剂溶解，测之。 比较法：经纸色谱将各种组份分开后，可在相同条件下， 制得标准系列图谱，与待测斑点颜色、面积进行比 较，确定其可能的含量。反射散射光谱法（即扫描 光度法；反射分光光度法）。 二、 原理 将固定相吸附剂均匀地涂在玻璃上制成薄层板，试样中的各组分在固定相和作为展开剂的流动相之间不断地发生溶解、吸附、再溶解、再吸附的过程。不同物质因为与固定相