DNA测序中常见影响因素的研究.pdfVIP

　生物技术通报 ·研究报告 ·　　　　　　　　　　 2005 年第 1 期 B IO TECHNOL O GY 　BULL ETIN 　　　　　　　　　 DNA 测序中常见影响因素的研究 1 1 2 宋艳斌 　马文丽 　郑文岭 ( 1 2 ) 南方医科大学分子生物学研究所 ,广州 　510515 ; 广州军区肿瘤分子生物学研究所 ,广州 　510010 摘 　要 : 　对测序中的模板 、引物 、测序反应条件及测序反应纯化方法和仪器操作等进行研究 。结果显示测序 模板的纯度影响测序 的质量 , 浓度对测序 的长度有影响 。引物设计时除符合一般设计原则外 , Tm 值最好在 50 ℃～60 ℃之间 ,且无成串的 G、C 。改变变性 、退火 、延伸的时间和温度对特殊 DNA 模板的序列测定有较好的效 果 。测序反应产物的纯化有几种方法 , 以70 %乙醇沉淀法最经济 、方便 。因此模板的纯度和浓度对测序成功与否 起决定作用 。最佳反应条件可降低成本 ,提高测序成功率 , 乙醇沉淀法是首选的测序反应产物纯化方法 。仪器操 作熟练 、正确与否也会影响测序结果 。 关键词 : 　DNA 　循环测序 　影响因素 The Influence of Some Factors on D NA Sequencing 1 1 2 Song Yanbin 　Ma Wenli 　Zheng Wenling ( 1Dep artment of B iochemistry , the First Military Medical University , Guangzhou 　510515 ; 2 ) Institute of Molecular Oncology , L iu Hua Qiao Hospital , Guangzhou 　510010 A bstract : 　The effects of DNA templates ,primers ,cycle sequencing reaction conditions , purification methods ,operation of in strument were comparatively analyzed. The quality of sequencing was influenced by the purity of templates ,the length of sequenc ing was influenced by the concentration of templates. The Tm value of primers should be between 50 ℃～60 ℃and there shouldn ’ t be too much G+ C in the primers. The alteration of the tempe