从个性化医疗看分子诊断的发展.ppt

基因表达与临床用药 QPCR-HRM技术 HRMA技术（high-resolution melting analysis）即高分辨熔解曲线分析技术，是近年兴起的一种全新的突变扫描和基因分型的遗传分析方法。基于高效稳健的PCR技术，HRM不受突变碱基位点与类型局限，无需序列特异性探针，在PCR结束后直接运行高分辨熔解，即可完成对样品突变、单核苷酸多态性-SNP、甲基化、HLA配型等的分析。 一、QPCR-HRM技术介绍 HRM的主要原理是根据DNA序列的长度，GC含量以及碱基互补性差异，应用高分辨率的熔解曲线对样品进行分析，极高的温度均一性和温度分辨率使分辨精度达到对单个碱基差异的区分。 HRM技术原理图 HRM技术特点 HRM的特点是高灵敏度和高特异性，检测灵敏度可以达到5%，既能检测出已知突变，也能检测出未知突变。 qPCR-HRM的突变检测已获国际多中心双盲实验验证，灵敏度和准确性比国际公认的DxS（Qiagen收购）公司产品还要更好，见下述参考文献1。 HRM技术应用举例（SNP） 检测低水平突变的新方法—COLD-PCR技术 如果COLD-PCR技术结合特异探针，其检测灵敏度是否还会提高？是否能够检测血浆中游离DNA的低比率突变？ 吉非替尼治疗非小细胞肺癌历程 首次 临床试验 对药物的反应率：9%-18% 总体生存率：无明显提高 根据EGFR 基因突变分组 基因突变组对吉非替尼的疗效显著高于非突变组 无进展生存率显著高于无基因突变患者 总体生存率无明显差异 EGFR抑制剂疗效需要生物标志来鉴别 DNA拷贝数 表达 基因突变 对药物的反应 总体生存率 吉非替尼对NSCLC靶向治疗 得到的启示 分子靶向治疗需要根据靶点的特性进行选择，分子靶向治疗也需要个体化医疗，而个体化医疗需要大量的分子生物学检测来支持。目前，由于许多疾病发病机制尚不明确，personalized medicine is still in its infancy，因此我们必须发展各种检测方法和检测项目来支持和推进个体化医疗。 RRM1过度表达可作为吉西他宾耐药预测因子 TUBB3高表达对紫杉和长春碱类不敏感 STMN1表达检测意义 -20 0 20 40 60 80 100 Shrinkage in Tumor Size (%) 1,000 100 10 1.0 0.1 Bepler et al. JCO 2006;24:4731-7. Phase II trial in patients with locally advanced NSCLC treated with cisplatin/gemcitabine (n=35) SD PR/CR Median 2.85 RRM1 Expression Red dots indicate patients with less than 30% tumor shrinkage is stable disease (SD), and green dots indicate patients with greater than 30% tumor shrinkage (partial remission/complete remission (PR/CR). 0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 0 10 20 30 40 50 60 70 Time (months) Cumulative survival P=0.039 7.5 7.5 RRM1过度表达可作为吉西他宾耐药预测因子 TUBB3高表达对紫杉和长春碱类不敏感 TUBB3阳性表达是抗微管类药物敏感预测因子 * STMN1表达检测意义 预后：表达水平越高，患者的生存率越低，肿瘤发生转移的风险越高。 疗效： 低表达接受长春瑞滨/顺铂治疗的效果较好，中位生存期较长； STMN1高表达接受长春瑞滨/顺铂的疗效较差。 Elizabeth A et al. Cancer Res. 2002;62:6864-6869 重要参考依据: 1.Vicki Whitehall, Kayla Tran, Aarti Umapathy. A Multicenter Blinded Study to Evaluate KRAS Mutation Testing Methodologies in the Clinical Setting. Journal of Molecular Diagnostics, Vol. 11, No. 6, November 2009. 2. Oliver Geulen, Christian Weilke, Michael Hoffmann.The LightCycler 480 real-time P