三七病程相关蛋白PR10-1基因克隆及功能初步分析.pdfVIP

药学学报 ActaPharmaceuticaSinica2015，50(2)：227—232 ·227 · 三七病程相关蛋 白PR10．1基因克隆及功能初步分析 唐美琼 ，闵丹丹 ，李 刚 ，蒋 妮 ，叶云峰 (1．广西药用植物园，广西药用资源保护与遗传改良重点实验室，广西 南宁 530023； 2．广西中医药大学，广西 南宁 530000) 摘要：采用同源克隆法和 RACE技术相结合，对三七根部蛋 白质组差异进行研究。鉴定 PR10—1蛋 白相应的 基因全长cDNA，初步分析该基因在三七中的功能。测序结果显示该基因序列全长863bp，包含 1个序列长465bp 编码 155个氨基酸的开放阅读框，命名为 JD—J，GenBank登录号KJ741402。氨基酸序列同源性及系统发育 树分析发现，PnPR10．1与人参的PR10．1蛋白同源性最高，含有 Bet．v．I家族等多个保守结构域。实时荧光定量 PCR分析显示，尸，z JD—J在 1～3年生三七各组织中均有本底表达，暗示其参与生长发育、代谢调控等生物学过 程； 艘 D一在根部受根腐病原菌 (Fusariumoxysporum)胁迫上调表达，推测P尸 JD』基因可能参与抗三七根 腐病等广谱抗病防御反应。 关键词：三七；病程相关蛋 白；基因克隆；表达模式；防御反应 中图分类号：R931 文献标识码：A 文章编号：0513-4870(2015)02—0227—06 Cloningandfunctionalcharacterizationofpathogenesis—related PRIO-1geneinPanaxnotoginseng TANGMei—qiong，MIN Dan—dan，LIGang ，JIANGNi，YEYun—feng (．GuangxiBotanicalGardenofMedicinalPlants,GuangxiKeyLaboratoryofMedicinalResourcesProtectionandGenetic Improvement,Nanning530023，China,~2．GuangxiUniversityofChineseMedicine,Nanning530000,China) Abstract：WithhomologycloningapproachescouplingwithRACE (rapid-amplificationofcDNAends) techniques，thefull-length coding sequenceofpathogenesis-relatedproteinPR10—1withdifferentialexpression wasclonedfrom thetotalRNA oftherootofPanaxnotoginseng，anditsfunctionwasexploredfurtherly． As aresult，thelongest465bpORF0namedasPnPRlo-iwiththeAccessionNo．KJ741402inGenBank was detectedrfom theclonedsequencewith full-lengthofcDNA of863bp． Thecorrespondingpeptideencoded consistedof155aminoacids，containedsomedomainssuchasBet—v—I，andshowedhighsimilaritywiththat from Panax ginseng by analysisofphylogenetic treescreated rfom thealignments． Real—timequantitative PCR showedthattheexpressionofPnPR1o—igenewas