5-氮杂-2%27-脱氧胞苷诱导E-cadherin基因去甲基化对胃癌细胞增殖、侵袭能力的影响.pdfVIP

摘要 摘要 背景： E．cadherin基因所编码的钙粘蛋白，在上皮细胞之间起着介导同质性黏附及 维持组织结构完整性的作用，是一种重要的抑癌基因，它可以抑制肿瘤细胞增 殖以及肿瘤细胞脱落后发生侵袭、转移。E．Cad基因的失活致使蛋白表达下调从 而促使肿瘤发生发展，而胃癌的侵袭转移则是术后复发和导致患者死亡的重要 原因。目前研究发现除基因突变、杂合性缺失等机制外，E．Cad基因启动子(即 5’端)CpG岛甲基化也是致该基因失活的重要机制。但不同于前两种机制的是， 基因启动子甲基化不涉及DNA序列自身改变，这种改变具有可逆性，通过消除 该基因启动子区域甲基化状态，使被封闭的E．cadherin基因重新获得表达，可抑 制肿瘤侵袭、转移生长，达到治疗肿瘤的目的，因此其可能成为研究肿瘤治疗 的新靶点。 目的： 因进行去甲基化处理，观察E．cardherin基因启动子甲基化状态是否逆转和重新 表达，以及了解去甲基化后胃癌细胞的增殖以及侵袭转移能力的变化；为今后 可能出现的肿瘤去甲基化治疗提供一定的基础研究。 方法： 1、购买胃癌MKN．45细胞株细胞，复苏、冻存、换液以及消化传代培养， 收集细胞备用。 2、予以实验分组，实验分为A、B、C三组，A：5-Aza．CdR处理组，B： DMSO+培养基处理组，C：空白对照组，处理培养72小时后收集各组细胞备用。 处理与否的侵袭能力的变化。 5、原位末端标记法(TUNEL)检测各组细胞凋亡的情况。 基化水平。 摘要 结果： 较，细胞生长速度呈现不同程度减缓，细胞生长明显受抑。 5-Aza．CdR去甲基化处理后，其mRNA恢复表达甚至表达上调。 分甲基化。5-Aza-dC能够诱导启动子处于甲基化状态的E．cad基因去甲基化。 处理后其侵袭能力下降，穿膜细胞数较对照组减少。 胞数增多，凋亡指数较对照组升高。 结论： 1、胃癌细胞系MKN．45中E．cad基因表达水平与DNA甲基化状况相关。 胃癌细胞系中E—cad基因启动子区域出现异常甲基化，可能是导致其基因失活的 主要原因。 基化并且表达增强。 下降，细胞凋亡数目增加。 4、去甲基化治疗可逆转基因启动子的甲基化状态，为今后的临床肿瘤治疗 提供新的指导思路，值得进一步研究。 Abstract ABSTRACT Background： E—cadherinbetweenthe Cadherinencoded cells，which by gene epithelial and thetissuestructural mediate adhesionmaintain integrity． homogeneity isan tumor Caninhibitthe of E—cadherin suppressorgene，it proliferation important tumorcellsandtheinvasionandmetastasisofcast．offtumorcells．E—Cad gene inactivationresultinreductionofthe ofthe and the expressionproteinprompte oftumors．Itisa reasonofrecurr