番茄红素的提取与分离.docVIP

番茄红素的提取与分离 摘要：设计了一个番茄红素的提取和分离的实验。提取采用溶剂分步萃取，分离采用柱层析法。并对番茄红素进行性质和含量测定。 关键词：番茄红素、分离、提取、分析 1、前言 番茄红素（Lycopene）是类胡萝卜素的一种，主要存在于番茄、西瓜、红色葡萄、柚、木瓜、番石榴等食物中，其中番茄中含量最高。番茄红素除提供鲜艳的红色外，还具有如淬灭单线态氧、清除自由基、诱导细胞间连接通讯、调控肿瘤细胞等多种生物学功能。尤其是她的淬灭单线态氧能力是目前常用抗氧化剂维生素E的100倍、β-胡萝卜素的2倍多，它是所有类胡萝卜素中最为有效的抗氧化物。番茄红素广泛分布于人体的各种器官和组织中，研究发现，在植物中存在的番茄红素几乎都是反式的，而在动物体内存在的番茄红素则是以顺式异构体的存在占的比例较大。 2、实验的基本思路 新鲜番茄 捣碎烘干 粗提取 分离 含量测定 3、实验过程 3.1、试剂和仪器 3.1.1、试剂 新鲜番茄（购于本地农贸市场），95%乙醇（C.P），二氯甲烷（C.P），丙酮（C.P），石油醚（60-90℃），氯仿（A.R），中性氧化铝（C.P），氯化钠（C.P），无水硫酸钠（C.P），苏丹红Ⅱ（C.P）。 3.1.2、仪器 50 ml圆底烧瓶2个，回流装置一套，恒温磁力搅拌器一台，50 ml锥形瓶3个，滤纸，玻璃棒1支，玻璃漏斗1个，带铁圈铁架台，100 ml分液漏斗1个，洗耳球1个，层析柱（15 cm左右内径为1~1.2 cm）一支，脱脂棉，长滴管1支，分析天平1台，1 ml、10 ml移液管各一支，100 ml的容量瓶1个，25 ml容量瓶5个，紫外分光光度计1台，pH计，高速粉碎机，烘箱等。 3.2、实验方法 3.2.1、材料处理 番茄洗净冻结、室温解冻、捣碎、55℃烘干、粉碎即得番茄粉末、密封、闭光保存备用。 3.2.2、提取 称取番茄粉末10g于50ml干燥的圆底烧瓶中，加极性的试剂（建议用95%乙醇）20ml，摇匀，装上回流冷凝管及恒温磁力搅拌器，在相应温度的水浴中加热，回流5分钟，冷却后抽滤，滤液直接进入一个的50ml锥形瓶中。残渣转入原50ml圆底烧瓶中瓶内，加入15ml低极性溶剂（建议用二氯甲烷），在相应温度的水浴上回流5分钟，冷却，混合物常压过滤，滤液直接滤入以上50ml锥形瓶中，再加5ml低极性溶剂洗涤残渣，过滤。合并高极性提取液和两次低极性提取液，倒入100 ml分液漏斗中，加4 ml饱和氯化钠溶液，振荡萃取，静置分层。分出较深色有机相后，使其流经一个在颈部装有疏松棉花且在棉花上铺有6 g无水硫酸钠的漏斗，以除去其中的微量水份。再用5 ml低极性溶剂洗涤干燥剂，合并干燥后所得的溶液于一干燥的50 ml圆底烧瓶中。水浴蒸馏溶液，蒸出大部分溶剂后，在通风橱内直接水浴加热圆底烧瓶，并用洗耳球不断向圆底烧瓶吹气，直到完全蒸干为止备用。 3.2.3、分离 利用混合物中各组分物化性质的差别，采用柱层析法分离。 （1）层析柱的制备：取一支长15cm左右内径为1~1.2cm的干燥的层析柱，将其垂直固定于铁架上，底部铺上少量棉花，打开活塞。称取8 g氧化铝小心倾入层析柱中，在氧化铝上铺一层棉花。然后向柱内加入15 ml石油醚，让溶剂浸润并流过层析柱，注意柱顶部溶剂不能干涸。待溶剂液面刚好与氧化铝表面相切时，关闭活塞，备用。 （2）柱层析分离：向蒸干的粗样品中加入2 ml苯使其溶解。用一长颈滴管取样，小心滴入层析柱内，注意产品不能接触柱壁。打开活塞，让溶液自然流下，待液面刚好与柱顶氧化铝表面相切时，加入2 ml石油醚，用50 ml干燥的锥形瓶接收滴出的溶液。待溶剂液面与氧化铝表面相切时，再加入8 ml或更多的石油醚，至滴出的溶液无色，关闭活塞，收集红色的番茄红素溶液。然后水浴蒸干。 3.3、分析测定 3.3.1、性质测定 （1）番茄红素的波谱性：取柱分离后得到的样品，用丙酮适当稀释至仪器测量范围，然后用分光光度计分别在420~520范围测定它们的光密度E，并做出E-λ曲线（每隔10nm 测定一次光密度）。指出各自最大吸收峰λmax ，并与标准吸收对照鉴定。 其中：f是C1稀释到C2倍数；各值的单位：C2：μg/ml；W番茄粉末：g。【3】 4、实验讨论 4.1、新鲜番茄果肉组织中含有大量水分，素处在含水量很高的细胞环境中，有机溶剂不易渗透进去，因此，为了提高提取效率，减少提取溶剂用量，。浓缩提取液时应当用水浴加热蒸馏瓶最好用减压蒸馏，而且不可蒸得太快、太干，以免素受热分解破坏。/bbs/viewthread.php?tid=10415 【2