辽宁MSM人群HIV-1原发感染者病毒全基因组序列特征研究.pdf

川Illl l r rlrfP r lll l IIIII Y1 768654 目 录 一、摘要 中文论著摘要……………………………………………l 英文论著摘要……………………………………………6 二、英文缩略语……………………………………………．11 三、论文 前言………………………………………．…………12翮f舌………………………………………．…………lZ 材料和方法……………………………………………．14 实验结果………………………………………………18 讨论……………………………．．．…………………．29 结论…………………………………………………．35 四、本研究创新性的自我评价…………………………………．36 五、参考文献………………………………………………37 六、附录 综述…………………………．。………………………44 致谢…………………………………………………．52 个人简介………………………………………………54 ·中文论著摘要· 辽宁MSM人群…v-1原发感染者病毒全基因组序列 特征研究 目 的 艾滋病是目前对人类社会威胁最大的传染性疾病之一。由于HIV-I存在高水 平的遗传变异性，尽管抗病毒药物已经普遍应用于艾滋病的治疗，但多年来艾滋 病的防治及疫苗的研究并未取得突破性进展。最新评估报告表明，男男性传播已 成为HIV-I感染的重要传播途径，男男同性恋是我国今后要重点关注和防治的人 群，而且我国人群的遗传背景又与欧美及非洲人种明显不同，其免疫应答极有可 能有新的特点。但目前我国对于男男同性恋人群感染HIV-I的分子流行病学等研 究还非常有限，针对我国男男同性恋中HIV-I感染者的疫苗和治疗研究缺乏HIV 病原学免疫学等基础资料的支持，因此了解男男同性恋原发感染者体内 transmitted／founder virus的生物学和基因组特征及病毒进化和传播关系，是今 后对于HIV-I高危人群开展防治工作的必要前提。 本研究选取21例我国辽宁省男男同性恋人群中HIV-I原发感染病例，采用SGA ／S方法获取病毒全基因组序列，从病毒全基因组水平分析男男同性恋人群中HIV-I 原发感染者的流行趋势及感染早期病毒的遗传变异水平，明确HIV-I感染早期毒株 的病毒学特征，预测原发感染者早期I型人类白细胞抗原限制性细胞毒性T淋巴细 胞表位并分析其氨基酸多态性，分析与不同疾病进展过程相关的免疫应答特征， 为我国HIV-I感染的预防、诊断、监测和治疗提供重要的数据支持。 材料和方法 1、研究对象 列按1．5个月的随访频率筛查出的原发感染病例。原发感染病例入选标准：进行 血清学ELISA筛查实验和wB确认实验，对血清学检测阴性者进行集合PCR核酸检 测，满足以下一项或多项条件者①在6个月内HIV抗体开始变阳性者②HIV抗体 阴性但HIVRNA阳性者③HIV抗体弱阳性但在两周之内可以重复并0D值较前次升 高者④有早期HIV感染的临床症状、HIV抗原阳性及wB抗体检测少于4条蛋白带 者。EDTA抗凝收集全血样本，4小时内分离血浆，-80。C冻存。 2、血浆样本RNA的提取 RNAMiniKit 病毒载量大于104c／ml的血浆样本，直接参照QIAaml徊Viral RNAMiniKit 离心l小时)以获得浓度较高的血浆RNA，再参照QIAamp@Vh：al 3、逆转录 Reverse 逆转录反应体系基于SuperScript@IIITr