鼠源性人肿瘤单链抗体库构建及乳腺癌相关抗体筛选.pdfVIP

中文摘要 鼠源性人肿瘸单链抗体库的构建及乳腺癌相关抗体的筛选 摘要 本研究是本室构建抗体库平台的一个组成部分。通过鼠源性人肿瘤单链抗体 库的构建及肿瘤相关抗体的筛选，旨在有助于本室更好地开展肿瘤分子生物学的 研究工作，有助于肿瘤的诊断与治疗。 待达到合适免疫效价后取鼠脾脏淋巴细胞提取总RNA，通过R1二PCR反转录成 cDNA，利用鼠VH、VL特异性引物扩增出VH、VL cDNA，并用Linker连接vH、 5E载体，电转化TGl菌，获得库容为1．3x106的单链抗体库。 在用抗体库筛选实验中，主要选乳腺癌细胞系McF．7和八正常肝细胞系 HL02做『F负差异筛选模型，运辟j固相和液相筛选方法，筛选到两株肿瘤相关抗 抗体申列不同的新基因。 将含这两种抗体基因的噬菌粒载体转入琥珀密码子非抑制型菌株TOPlO中， 诱导表达后，用WbstcnIblot检测，scFv．874具有明显的分泌性表达，并且在周 质及全细胞中都可以表达；而scFv罐73未检测出明显的分泌性表达，只在全细胞 中实现了游离形式的可溶性表达，并经镍柱(Ni．NTA)得到有效纯化。 本研究获得了针对人肿瘤细胞的棚关抗体，并实现了可溶性表达和纯化，为 下一步工作奠定了基础，并探索了符合本实验室实际情况的抗体库技术平台的构 建路线，为肿瘤特别是乳腺癌的早期诊断和治疗奠定了基础。整个研究也符合本 实验室肿瘤分子生物学研究的方向，有助于璺好地开展相关工作。 关键词：肿瘤细胞，单链抗潍，噬菌体展示，表达纯化 英文摘要 withhumantumOrimmunisedmice ConstructionOfscFv fhm Iibrary and antibodiestobreastcancer screening binding Abstract ThisW0rkistlleone ofthe inourLab．TofaciIitate pan antibodylibraryplatfonll ourresearchintumorm01ecularand tIle aIld for biologyinVestigatediagnosisther印y constnlctedascFV withh啪ant啪orcellsf如mimmunisedmice tumor，we library 锄dscreenedt、voantibodiestotumorcells． binding Therecombinant usedtoconstructa Fv phagealltibodysystemⅥfas single—chain BALB／cmicewere 劬gmem(scFV)cDNAIib捌阱First immunisedwithhumallbreast lines c粕cercell totalRNAwasisolated丘omtlle MCF-7，T47D，MDA-MB．435，aIld of wasusedto cDNAfromtotalRNA． inunllIlized耐ce，RT．