色谱分析法导论.pptVIP

* 图18d1说明了柱效和选择性对分离的影响。图中（a）两色谱峰距离近并且峰形宽。两峰严重相叠，这表示选择性和柱效都很差。图中（b）虽然两峰距离拉开了，但峰形仍很宽，说明选择性好，但柱效低。图中（c）分离最理想，说明选择性好，柱效也高。 由此可见，单独用柱效或选择性不能真实反映组分在色谱柱中分离情况，故需引入一个综合性指标——分离度R。分离度是既能反映柱效率又能反映选择性的指标，称总分离效能指标。分离度又叫分辨率，它定义为相邻两组分色谱峰保留值之差与两组分色谱峰底宽总和之半的比值 * 对于两个峰高相同的对称峰，达到基线分离时，Rs=1.5，此时，两组分的分离程度达99.87%，因此用Rs =1.5作为相领两峰完全分离的指标。当Rs=1.0时，两峰分离程度达97.72%。如果两峰的高度相差10倍，当Rs=1.0时，低含量组分的分离程度只有88%，这是因为两峰交叉“污染”时，在低含量组分中夹杂的在两峰等高时的相同高含量组分所占的比例增大。 利用式（6-30）可直接从色谱图上求出分离度。 * 分离度R的定义并没有反映影响分离度的诸因素。实际上，分离度受柱效（n）、选择因子(α)和容量因子（k）三个参数的控制。假设W1≈W2 。由以前的公式可推出,RS 上式为色谱基本分离方程式。式中下标2为相邻两组分中的第二组分。该方程可视为三个因素的函数：柱效因子n，柱选择性因子α和容量因子k′，这三个参数可以直接从色谱图上计算得到。 ? 当n、k′为0或α为1时，分离度为零。增加n或k′和α值对分离有利。 柱效的影响 柱长L∝n，增加柱长可以提高分离度，但会延长分析时间，而且峰宽也会随保留时间的延长而增加。因此为了增高柱效，用减小塔板高度H的办法比增加柱长要好。 为了达到实际工作中所需要的分离度，根据下式可以计算出在给定分离度下应具有的塔板数n。 (2) 分配比的影响 增加k’ ?, ，根据式(6.14)，k′值越大，分析时间越长，峰越展宽。通常k′值选择在1-10范围内。改变分配比的方法有：改变柱温或改变流动相性质和组成，或改变固定相的含量。 对于气相流动相来说,提高温度可提高K’ 对于液相流动相,改变固定相的组成,可提高K’ (3) 相对保留值 α越大，柱选择性越好，对分离越有利。分离度对α值微小变化很敏感， 改变α值的方法有：改变固定相性质，或改变流动相性质及组成，或采用较低柱温，从而增大α值。在气相色谱法中，通过改变固定相来改善α值，因为流动相是惰性的。在液相色谱中，则往往改变流动相来改变α值，因为其固定相过于昂贵。 由上可知，在n、k′及α三个参数中，增加α对改进分离最有效，但也不是越大越好。当α值趋近1时，增加α，对改进R2显著，但当α值超过1.5后，α的改变对Rs的影响较小。 当固定相选定后，即α一定，k′大对分离有利。当k′超过10时，对Rs的改进不明显，而保留时间却大大延长。 * 柱子的H一定,即填充的东西一模一样 达到基线分离,即RS为1.5 另外一种解法参见书. 关键是要记住RS算法,K’,alpha算法 * 曲线的最低点，塔板高度H最小，柱效最高，其相应的流速是最佳流速. 从图19-12可知，当u较小时，分子扩散项B/u是影响板高的主要因素，此时，宜选择相对分子质量较大的载气（N2，Ar），以使组分在载气中有较小的扩散系数。当u较大时，传质阻力项Cu起主导作用，宜选择相对分子质量小的载气(H2,He)，使组分有较大的扩散系数，减小传质阻力，提高柱效。当然，载气的选择还要考虑与检测器相适应。 * 柱温是一个重要的操作参数，直接影响分离效能和分析速度。 2、塔板理论之推导结论 流出曲线的形状 当组分进入色谱柱后，在每块塔板上进行两相间的分配，塔板数越多，组分在柱内两相间达到分配平衡的次数也越多，柱效越高，分离就越好. n?50 流出曲线呈基本对称的峰形； 当 n 达 103－106 流出曲线趋近于正态分布； 2）评价柱效的参数 理论塔板高度（H） 理论塔板数(n) 有效理论塔板数 注意事项： （1）n大，柱效高，分离好，前提是两组分分配系数K应有差 异，否则n无论多大，两组分将无法分离。 有效理论塔板高度 （2）同一色谱柱对不同的物质的柱效是不一样的，因此用n 表示柱效时必须注明对什么物质而言。 例1：在1.0m柱上测得组分A和非滞留组分的保留时间分别为8.40min和1.60min，组分A峰的峰底宽为4.5mm ，记录纸速度为300mm/h。计算该柱的有效理论塔板高度。 解： 3. 塔板理论之局限性 塔板理论是一种半经验性的理论，它用热力学的观点定量说明了溶质在色谱