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常规组织病理技术 沈 明 常规石蜡切片制作程序 组织固定 取材 固定 脱水 透明 浸腊 包埋 切片 染色 封片 观察 一 固 定 1.组织固定的意义 ①防止组织细胞自溶和腐败 ②保持组织细胞正常生活时的形态结构 ③沉淀和凝固各种物质,硬化组织便于制片和染色后的观察 2.固定的注意事项 ①一般应在离体30分钟内固定,越及时越好,并将组织上的血液,分泌物冲洗干净 ②固定剂的量一般不少于组织块总体积的4倍以上 ③固定的时间应视组织的不同和大小决定,一般小组织4-6小时,大组织18-24小时或更长 ④有特殊要求的须用特殊的固定剂 ⑤不同组织在固定时应注意特殊的处理方法 3.常用的固定剂 ①甲醛(10%福尔马林) 甲醛 100ml 水 900ml ②中性甲醛 甲醛 100 ml Na2HPO4 6.5g NaH2PO4 H2O 4g 蒸馏水至 900 ml ③乙醇-甲醛(AF液) 甲醛 100 ml 95%乙醇 850 ml 冰醋酸 50 ml ④其他 4%多聚甲醛 :多聚甲醛4g, 加蒸馏水50ml,加热至60度,搅拌加入1mol/L NaoH数滴,直至溶液变清,冷却后用0.1mol/L PBS( PH7.4 )加至100ml. Carnoy氏液(糖原,DNA,RNA,尼氏小体固定用,小组织20-40分钟,不超过3-4小时) 冰醋酸 10 ml 氯仿 30 ml 无水乙醇 60 ml 二 取 材 1.外科的活体组织取材 ①临床手术取材(大标本) 注意肿瘤的部位 形状 大小 颜色及周边组织的关系 ,有无完整包膜,测量体积,包括长度 宽度 高度.手术大标本必须进行预取材 预固定. ②活体小组织(小标本) 组织标本体积小,在取材时应特别小心,用伊红让标本着色,并用插镜纸包裹,以防丢失,应标明粒数.多瓶组织应将附号标清楚. 2. 动物标本取材: ①动物致死法 麻醉法,空气栓塞法,断头法,击头法,股动脉放血法等,要求动作迅速,及时解剖,取材与固定 ②动物取材注意事项:准备好锋利的刀剪,固定液,取材应新鲜,最好是心脏还在跳动时取材,并立即投入固定液.组织块厚度不超过3mm(应将组织上的血液,渗物,粘液粪便等用生理盐水冲洗干净,选好组织块的切面,切除不需要的部分,再固定),应尽可能维持组织原形,对神经肌肉皮肤组织,可将其两端固定在木板或硬纸板上,然后再固定. 三 脱 水 脱水的目的:组织最终将包埋在石蜡中,才能进行切片,为达到这一目的,首先须将组织内的水分置换出来,以利于透明剂渗入,这一过程为脱水.(一般情况下,应将大小标本分别脱水.标本脱水从低浓度开始,一般人标本从70%或75%乙醇,动物标本从50%乙醇开始) 脱水方法及注意事项: 常用试剂为乙醇,某些情况下用丙酮. 快速石蜡切片常用丙酮为脱水剂,尸体解剖标本一般在无水乙醇后加丙酮 因为脱水剂的新旧影响脱水时间,必须灵活掌握,根据本实验室情况,定时更换脱水剂. 四 透 明 透明的目的:因为大多数脱水剂不能和石蜡相混合,组织内的水份脱干净后,必须通过透明剂的作用,才能便于浸蜡包埋. 常用透明剂种类及注意事项: 二甲苯 甲苯 松节油 苯 透明要注意的关键是时间,透明时间不够,石蜡不能完全进入组织,影响到包